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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » MTT实验用蛋白过滤后浓度降低很多怎么回事
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daiguoying

木虫 (小有名气)

[求助] MTT实验用蛋白过滤后浓度降低很多怎么回事

求助各位大虾:
mtt 实验用蛋白加样前用0.2um 滤膜过滤，MTT实验结果出来后发现只有最高浓度有抑制效果，怀疑蛋白浓度有问题，因为过滤前发现溶液中有细小颗粒析出，再次测过滤后蛋白浓度，才发现原来几乎没有蛋白了，这是到底是怎么回事呢，怎样解决？（滤膜之前一直用没问题）
蛋白用PB缓冲液溶解，另外含NaCl 0.5mol/l ,甘油体积比为20%，DTT 5umol/l
蛋白为包涵体表达，最后用超滤管超滤，蛋白过滤前侧浓度为200ug/ml
不剩感激~

[ Last edited by daiguoying on 2011-11-21 at 23:00 ]
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DO NOT LOSE TIME
1楼 2011-11-21 22:48:36
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

暖木warm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 暖木warm at 2011-11-23 10:33:07:
我的没有染菌，你可以试试

你的蛋白是从哪来的
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daiguoying
9楼2011-11-23 10:34:16
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普通回帖

daiguoying

木虫 (小有名气)
不要沉呐，钱还没撒出，真心等待高人指点
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DO NOT LOSE TIME
2楼2011-11-22 14:28:52
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暖木warm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by daiguoying at 2011-11-21 22:48:36:
求助各位大虾:
mtt 实验用蛋白加样前用0.2um 滤膜过滤，MTT实验结果出来后发现只有最高浓度有抑制效果，怀疑蛋白浓度有问题，因为过滤前发现溶液中有细小颗粒析出，再次测过滤后蛋白浓度，才发现原来几乎 ...

蛋白是大分子，过滤的话应该会浓度降低，我试过，所以，我就不过滤了。你用什么方法测的蛋白浓度？
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3楼2011-11-22 19:18:14
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daiguoying

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖木warm at 2011-11-22 19:18:14:
蛋白是大分子，过滤的话应该会浓度降低，我试过，所以，我就不过滤了。你用什么方法测的蛋白浓度？

首先，谢谢你
我用考马斯亮蓝测得蛋白浓度，另外，如果做MTT不过滤的话染菌怎么办呢？
谢谢
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DO NOT LOSE TIME
4楼2011-11-22 21:22:10
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有何不可

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做的时候过滤了，当时看到有沉淀，应该是还没有溶解的MTT颗粒吧，但我还是把它过滤掉了，做出的结果还不错。你看看其他地方还有疏漏的吗，有没有加0.1%的HCL，，
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只要努力,你想要的,岁月都会给你.
5楼2011-11-23 10:01:11
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daiguoying

木虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 有何不可 at 2011-11-23 10:01:11:
我做的时候过滤了，当时看到有沉淀，应该是还没有溶解的MTT颗粒吧，但我还是把它过滤掉了，做出的结果还不错。你看看其他地方还有疏漏的吗，有没有加0.1%的HCL，，

你好，我过滤的是要上MTT的蛋白，不是MTT，蛋白是自己提取得，谢谢~
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DO NOT LOSE TIME
6楼2011-11-23 10:09:48
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有何不可

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by daiguoying at 2011-11-23 10:09:48:
你好，我过滤的是要上MTT的蛋白，不是MTT，蛋白是自己提取得，谢谢~

呃  呵呵 实在不好意思啊 没看清楚就回复了 罪过罪过，，
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daiguoying
只要努力,你想要的,岁月都会给你.
7楼2011-11-23 10:13:02
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暖木warm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by daiguoying at 2011-11-22 21:22:10:
首先，谢谢你
我用考马斯亮蓝测得蛋白浓度，另外，如果做MTT不过滤的话染菌怎么办呢？
谢谢

我的没有染菌，你可以试试
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daiguoying
8楼2011-11-23 10:33:07
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daiguoying

木虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 暖木warm at 2011-11-23 10:33:07:
我的没有染菌，你可以试试

好，我这两天试一下，谢谢~
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DO NOT LOSE TIME
10楼2011-11-23 11:41:36
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