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daiguoying

木虫 (小有名气)

[求助] MTT实验用蛋白过滤后浓度降低很多怎么回事

求助各位大虾:
mtt 实验用蛋白加样前用0.2um 滤膜过滤,MTT实验结果出来后发现只有最高浓度有抑制效果,怀疑蛋白浓度有问题,因为过滤前发现溶液中有细小颗粒析出,再次测过滤后蛋白浓度,才发现原来几乎没有蛋白了,这是到底是怎么回事呢,怎样解决?(滤膜之前一直用没问题)
蛋白用PB缓冲液溶解,另外含NaCl 0.5mol/l ,甘油体积比为20%,DTT 5umol/l
蛋白为包涵体表达,最后用超滤管超滤,蛋白过滤前侧浓度为200ug/ml
不剩感激~


[ Last edited by daiguoying on 2011-11-21 at 23:00 ]
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DO NOT LOSE TIME
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暖木warm

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
1楼: Originally posted by daiguoying at 2011-11-21 22:48:36:
求助各位大虾:
mtt 实验用蛋白加样前用0.2um 滤膜过滤,MTT实验结果出来后发现只有最高浓度有抑制效果,怀疑蛋白浓度有问题,因为过滤前发现溶液中有细小颗粒析出,再次测过滤后蛋白浓度,才发现原来几乎 ...

蛋白是大分子,过滤的话应该会浓度降低,我试过,所以,我就不过滤了。你用什么方法测的蛋白浓度?
3楼2011-11-22 19:18:14
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daiguoying

木虫 (小有名气)

不要沉呐,钱还没撒出,真心等待高人指点
DO NOT LOSE TIME
2楼2011-11-22 14:28:52
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daiguoying

木虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 暖木warm at 2011-11-22 19:18:14:
蛋白是大分子,过滤的话应该会浓度降低,我试过,所以,我就不过滤了。你用什么方法测的蛋白浓度?

首先,谢谢你
我用考马斯亮蓝测得蛋白浓度,另外,如果做MTT不过滤的话染菌怎么办呢?
谢谢
DO NOT LOSE TIME
4楼2011-11-22 21:22:10
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有何不可

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我做的时候过滤了,当时看到有沉淀,应该是还没有溶解的MTT颗粒吧,但我还是把它过滤掉了,做出的结果还不错。你看看其他地方还有疏漏的吗,有没有加0.1%的HCL,,
只要努力,你想要的,岁月都会给你.
5楼2011-11-23 10:01:11
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