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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求替代超滤浓缩的蛋白的方法
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
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9楼: Originally posted by laoboshihou at 2012-11-29 09:33:25
millipore的超最方便。可否考虑用真空干燥的方法，用离心机干燥的方法。

真空干燥是怎么操作？要什么设备？
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11楼2012-11-29 10:45:34
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
送鲜花一朵
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10楼: Originally posted by zq347597638 at 2012-11-29 10:44:13
买个好的透析袋，用蔗糖或者聚乙二醇覆盖在上面快速吸水  处理  （蔗糖烘干后可以反复使用）

好吧，我试试，看起来不需要什么特别的设备，还蛮方便的。
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12楼2012-11-29 10:53:52
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yongbo_liang

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
月落星沉: 金币+3, ★有帮助 2012-12-01 14:35:31
直接用硫酸铵沉淀，1小时内搞定，然后用缓冲液溶解出来：
1。脱盐：如果盐影响你蛋白的离子交换柱的吸附，就脱盐。
2.不脱盐，可直接稀释1-2倍，直接上离子交换柱，并不影响吸附，同时体积也小的多，也就10-50ml之间吧。
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月落星沉
13楼2012-11-29 16:14:47
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
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引用回帖:
13楼: Originally posted by yongbo_liang at 2012-11-29 16:14:47
直接用硫酸铵沉淀，1小时内搞定，然后用缓冲液溶解出来：
1。脱盐：如果盐影响你蛋白的离子交换柱的吸附，就脱盐。
2.不脱盐，可直接稀释1-2倍，直接上离子交换柱，并不影响吸附，同时体积也小的多，也就10-50ml之 ...

盐析我试过，沉淀总是溶解不完全，总有白色的细密的粉末状的东西。我都用了100多ml的缓冲液了，还是溶不掉。后来我把它们离心下来，再加缓冲液，还是不溶，不过新加的缓冲液也可以测到酶活。你知不知道这是怎么回事？
还有就是上柱子前的脱盐，用的是透析的方法，可是泡2天透析袋就破了。。。
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14楼2012-12-01 14:31:05
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william9798

铜虫 (小有名气)
强烈建议冷冻干燥
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15楼2012-12-01 15:44:30
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qianshengguo

铜虫 (小有名气)
“之前还试过盐析的方法替代，但不知道为什么，透析除盐的时候，透析袋总是很容易就破了（像是被溶解了似的，透析2天后，看着好好的，轻轻一碰就破掉了）"
你用的大概多少ml的透析袋，装了多少蛋白液？
我猜可能是你蛋白装的量太多了，而且蛋白浓度较高，盐析时量较大，那重量把透析袋撑破了，你可以考虑用多个透析袋同步进行。而且你直接透析了2天？你可以考虑中途换透析袋啊。
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16楼2012-12-04 14:09:30
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
16楼: Originally posted by qianshengguo at 2012-12-04 14:09:30
“之前还试过盐析的方法替代，但不知道为什么，透析除盐的时候，透析袋总是很容易就破了（像是被溶解了似的，透析2天后，看着好好的，轻轻一碰就破掉了）"
你用的大概多少ml的透析袋，装了多少蛋白液？
我猜 ...

一般是装半管或者或2/3管，透析袋使用的部分大概20cm长，宽度是21mm，这个量装太多了吗？
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17楼2012-12-05 09:52:27
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月落星沉

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by zq347597638 at 2012-11-29 10:44:13
买个好的透析袋，用蔗糖或者聚乙二醇覆盖在上面快速吸水  处理  （蔗糖烘干后可以反复使用）

貌似蔗糖混进去了
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18楼2012-12-05 09:53:57
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小李爱学习

铜虫 (正式写手)
先用硫酸铵分级沉淀，沉淀出来后加少量缓冲液溶解，然后透析出去硫酸铵，一定要注意透析袋不要装超过二分之一，用进口透析袋和进口透析夹。透析后再上柱子才行。
如果硫酸铵无法沉淀出来（蛋白浓度过低），就先冷冻干燥，再加适量缓冲液溶解（这一步是为了提高蛋白质浓度，只有蛋白浓度达到1mg/ml的时候，硫酸铵沉淀才有较好的效果），然后再加硫酸铵沉淀。
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19楼2013-04-01 20:09:11
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小李爱学习

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by 月落星沉 at 2012-12-01 14:31:05
盐析我试过，沉淀总是溶解不完全，总有白色的细密的粉末状的东西。我都用了100多ml的缓冲液了，还是溶不掉。后来我把它们离心下来，再加缓冲液，还是不溶，不过新加的缓冲液也可以测到酶活。你知不知道这是怎么回事 ...

硫酸铵沉淀的时候一定要慢慢加，不用把硫酸铵沉淀；不溶的就不要了，也许是变性的蛋白。
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20楼2013-04-01 20:17:55
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