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月落星沉

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 289.5
帖子: 18
在线: 28.4小时
虫号: 1246646
注册: 2011-03-27
性别: MM
专业: 环境微生物学

[求助] 求替代超滤浓缩的蛋白的方法

各位虫友有没有什么好的浓缩蛋白的方法？
我需要将发酵液，体积大约1~2L，浓缩到几十毫升左右，然后上柱子，分离纯化蛋白。
之前用的是millipore的超滤杯和配套的聚醚砜膜，但是现在以前师兄剩下的膜用完了，询问试剂公司说millipore聚醚砜材料的那种膜停产了，只有纤维素材质的膜，但这种纤维素膜似乎不适合浓缩浓度较大的蛋白溶液（我的蛋白浓缩后大概能达到4~5mg/ml的浓度）。
之前还试过盐析的方法替代，但不知道为什么，透析除盐的时候，透析袋总是很容易就破了（像是被溶解了似的，透析2天后，看着好好的，轻轻一碰就破掉了），白白损失了很多酶。
不知各位有没有什么好的适合我这种情况的浓缩蛋白的方法，或者知道有其他什么品牌质量好的聚醚砜材质的超滤膜.

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1楼 2012-11-27 21:08:06

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

小李爱学习

银虫 (正式写手)

应助: 19 (小学生)
金币: 122.6
散金: 16
红花: 5
帖子: 796
在线: 297.7小时
虫号: 949231
注册: 2010-01-27
专业: 食品加工学基础

先用硫酸铵分级沉淀，沉淀出来后加少量缓冲液溶解，然后透析出去硫酸铵，一定要注意透析袋不要装超过二分之一，用进口透析袋和进口透析夹。透析后再上柱子才行。
如果硫酸铵无法沉淀出来（蛋白浓度过低），就先冷冻干燥，再加适量缓冲液溶解（这一步是为了提高蛋白质浓度，只有蛋白浓度达到1mg/ml的时候，硫酸铵沉淀才有较好的效果），然后再加硫酸铵沉淀。