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kong10

新虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】硫酸铵沉淀蛋白已有9人参与

提取酶时,采用硫酸铵沉淀,然后离心,但买看到蛋白,请问是哪里出现问题,离心速度一般要多大,还有整个沉淀操作过程中需要注意什么,样品量少,缓冲液也就几ml,非常感谢!
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chaoen

木虫 (正式写手)

又硫酸铵沉淀问题


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
本人最近在做蛋白质的沉淀,同时用目的纯化酶和粗酶液做的。
发现纯化酶在沉淀时,活力大部分在30%-40%中,部分存在在40%-50%中。我想请问大家那是不是意味着我用粗酶液做的话,目的酶也应该大部分在30-40%中呢?因为酶活测定粗酶液时,有其他污染酶干扰。没法测出可靠的酶活。
谢谢!
10楼2011-01-15 05:54:25
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

加了多少硫酸铵呢?
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2011-01-12 23:54:41
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kong10

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-01-12 23:54:41:
加了多少硫酸铵呢?

80%饱和度,我从叶片提取,叶绿素含量太大,都不知道蛋白在哪,溶液不会变澄清吗?就是上清
3楼2011-01-13 18:08:37
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chaoen

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
rainwander(金币+1):欢迎参与讨论~~~ 2011-01-13 20:12:08
最近我也在做硫酸铵沉淀,大家一起讨论讨论
当加到80%的SAS应该很容易看到有悬浮物了吧,是不是可以直接视觉角度可以判断的啊?
如果是测定蛋白觉得没有的话,说明蛋白检测方法和叶绿素有干扰吧
4楼2011-01-13 19:44:17
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