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【求助/交流】关于硫酸铵沉淀的问题 已有7人参与
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| 我在做酶纯化，先把发酵液硫酸铵分级沉淀，结果每一级都有活性，也有蛋白，比活都差不多，一点都没分开。于是我又把分级的沉淀合并过超滤膜，先过的十万的膜，结果蛋白都在十万以上，十万以下几乎什么都没有。我觉得这个结果有问题，怎么可能两种方法都一点效果都没有。而且发酵液里怎么会没有十万以下的蛋白呢？这到底是为什么呢？亲们，谁能告诉我呀，或者有谁有过同样的情况啊！ |
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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很详细，感谢交流~~ 2010-07-09 17:06:32
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+2):很详细，感谢交流~~ 2010-07-09 17:06:32
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先说硫酸铵沉淀 你可以先做个小试：将样品分成五等分，每等份分别加入20%、30%40%、50%、60%的硫酸铵。取上清去沉淀，然后再分别往上清中加入硫酸铵至：30%、40%、50%、60%、70%。取沉淀再溶解测活性。这样就能大致清楚你所需要蛋白的沉淀浓度了。 关于超滤也有很多实际问题。超滤膜给出的分子量数值只是一个大致的范围，它不可能分的很准确，一般要选择比目标蛋白大2-3倍左右的膜来分离。比如你所需要分离的蛋白分子量有5万，那么你就要选择10万-15万的膜。 楼主所说的将分级沉淀合并过10万膜，很有可能过下去的分子量都在5万以下，甚至更低，结合你自己的实验条件，你的发酵液里小分子量蛋白可能比较少。 |
3楼2010-07-09 16:06:38