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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】求助关于蛋白纯化的问题！
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lxyyzz

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】求助关于蛋白纯化的问题！ 已有5人参与

纯化的蛋白分子量大概25KDa, 纯化效果还可以，但是透析浓缩后再跑胶，目标条带就看不见了，有哪位高人遇到类似的问题没有？这个是怎么回事？
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1楼 2010-06-26 14:09:40
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zemin_fang

木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2010-06-26 14:31:37
lxyyzz(金币+1):谢谢 2010-06-26 14:39:17
你用的透析袋的截留分子量上限是多少？你的估计要用上限是10kd的
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2楼2010-06-26 14:19:32
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
用的透析袋截留分子量是14kDa,这个应该可以的吧。。。
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3楼2010-06-26 14:39:01
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yaojc

木虫 (正式写手)
纯化后电泳检测了没有，浓缩之后跑胶的电压大小，电泳时间长短，分离胶的浓度。要考虑是否已经跑出去了，毕竟25KD不是很大
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专注、专心、专业
4楼2010-06-26 16:34:26
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yaojc

木虫 (正式写手)
★
dhd997(金币+1):有道理。谢谢交流。 2010-06-26 16:38:28
lxyyzz(金币+1):纯化后的电泳很正常。不会是跑出去了。MARKER的条带都还在啊 2010-06-26 20:32:34
纯化后电泳检测了没有，浓缩之后跑胶的电压大小，电泳时间长短，分离胶的浓度。要考虑是否已经跑出去了，毕竟25KD不是很大
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专注、专心、专业
5楼2010-06-26 16:35:16
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purplerain2586

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
amisking(金币+3):最近比较活跃，鼓励一下。 2010-06-26 19:15:52
lxyyzz(金币+1):但是浓缩后的蛋白酶活还在，应该不会是跑出去了啊。不明白怎么回事 2010-06-26 20:33:10
怀疑是不是超滤膜截留分子量跟你的分子量差得不远，厂家又偷工减料，把膜孔弄大了一点，蛋白质哧溜一下就跑出去了。建议再选择一下超滤膜。
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6楼2010-06-26 17:39:52
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lxyyzz

木虫 (小有名气)
这个蛋白虽然看不到条带，可是测酶活还是有的啊。真不知道是怎么回事了。。。
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7楼2010-06-26 20:47:41
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mofashishe

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+5):热心虫友，欢迎多来交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2010-06-26 23:19:34
lxyyzz(金币+2):恩。是考染的。谢谢哈，我考虑换换透析袋看看 2010-06-28 10:42:08
引用回帖:
Originally posted by lxyyzz at 2010-06-26 20:47:41:
这个蛋白虽然看不到条带，可是测酶活还是有的啊。真不知道是怎么回事了。。。

请问楼主你是用什么染色的，是考染还是银染啊，考染的话是不灵敏度不够所以没看见有条带啊。

以前我买超滤膜的时候业务员说是要选择分子量一半以下的，估计14Kda的膜蛋

白不会全部都跑出去的，但应该剩下不多，如果考染就会没带。

酶活灵敏度比考染要高的。
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8楼2010-06-26 22:46:57
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