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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化问题! 已有3人参与

大家帮忙分析一下吧
我用很久以前保的菌纯化蛋白,发现蛋白量相对以前减少了(我的蛋白是GST标签的),而且纯化出来GST的量大概是蛋白的两倍,比以前增多约三四倍,所以我重新提取质粒,重新做了一次转化,但是纯化出来的蛋白还是跟以前一样,没有改善。。。
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-10-27 13:51:49:
呵呵,这个问题很常见的,不同克隆之间都是有差异的,有的克隆表达量高,有的克隆虽然也表达,但是量可能就少很多。我们一般都是经过两轮克隆筛选的,然后保存表达高的克隆进行冻存,这样将来你的表达量既高且很稳 ...

“两轮克隆筛选”是指转化两次吗?能具体说说吗?谢谢你!
4楼2010-10-27 20:56:01
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guoenwen

金虫 (小有名气)

可能发生变异了。
2楼2010-10-27 13:46:15
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
1949stone(金币+2):有见地 2010-10-27 13:55:17
呵呵,这个问题很常见的,不同克隆之间都是有差异的,有的克隆表达量高,有的克隆虽然也表达,但是量可能就少很多。我们一般都是经过两轮克隆筛选的,然后保存表达高的克隆进行冻存,这样将来你的表达量既高且很稳定。

祝好运
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-10-27 13:51:49
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-10-27 20:56:01:

“两轮克隆筛选”是指转化两次吗?能具体说说吗?谢谢你!

不是的,呵呵,我给你提供一篇文献你看看,里面有 double selection for high-level expression,发表在 protein science 上的,practical protocols for production of very。。。

链接如下:
http://www.proteinscience.org/de ... ant_proteins_u.html
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2010-10-28 09:11:15
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