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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白纯化问题！
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】蛋白纯化问题！ 已有3人参与

大家帮忙分析一下吧
我用很久以前保的菌纯化蛋白，发现蛋白量相对以前减少了（我的蛋白是GST标签的），而且纯化出来GST的量大概是蛋白的两倍，比以前增多约三四倍，所以我重新提取质粒，重新做了一次转化，但是纯化出来的蛋白还是跟以前一样，没有改善。。。
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1楼 2010-10-27 10:15:49
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2010-10-27 13:51:49:
呵呵，这个问题很常见的，不同克隆之间都是有差异的，有的克隆表达量高，有的克隆虽然也表达，但是量可能就少很多。我们一般都是经过两轮克隆筛选的，然后保存表达高的克隆进行冻存，这样将来你的表达量既高且很稳 ...

“两轮克隆筛选”是指转化两次吗？能具体说说吗？谢谢你！
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4楼2010-10-27 20:56:01
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guoenwen

金虫 (小有名气)
可能发生变异了。
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2楼2010-10-27 13:46:15
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★ ★
1949stone(金币+2):有见地 2010-10-27 13:55:17
呵呵，这个问题很常见的，不同克隆之间都是有差异的，有的克隆表达量高，有的克隆虽然也表达，但是量可能就少很多。我们一般都是经过两轮克隆筛选的，然后保存表达高的克隆进行冻存，这样将来你的表达量既高且很稳定。

祝好运
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
3楼2010-10-27 13:51:49
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-10-27 20:56:01:

“两轮克隆筛选”是指转化两次吗？能具体说说吗？谢谢你！

不是的，呵呵，我给你提供一篇文献你看看，里面有 double selection for high-level expression，发表在 protein science 上的，practical protocols for production of very。。。

链接如下：
http://www.proteinscience.org/de ... ant_proteins_u.html
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
5楼2010-10-28 09:11:15
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