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丫头7976

铜虫 (正式写手)


[交流] 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化

ni是与组氨酸残基中咪唑环结合,那么当带有高浓度的咪唑溶液洗脱时,咪唑与his-tag的咪唑环竞争结合ni,所有蛋白才会被洗脱下来,但是存在一个问题,咪唑完全跟ni结合了,第二次上样的时候,带his-tag的蛋白怎么跟镍柱结合呀,因为镍都被咪唑结合着,用什么方法再把咪唑洗脱下来呢?请各位高手指教!
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doublehelix

木虫 (著名写手)


★ ★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流,欢迎常来 2011-10-13 10:35:11
柱子需要再生,先变性,再经过一系列的洗脱等程序...
5楼2011-10-12 23:18:56
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★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
丫头7976(金币+1): 灭菌水和乙醇能把镍洗干净吗,得用EDTA,把镍洗下来顺便就把咪唑洗下来了吧 2011-10-13 08:13:40
lstt09nk(金币+1): 鼓励参与 2011-10-13 10:35:26
分别用灭菌水和20%乙醇洗柱子若干次,让柱子再生。
3楼2011-10-12 20:45:16
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lihuan0525

金虫 (职业作家)



丫头7976(金币+1):谢谢参与
再生后在过柱子吧
4楼2011-10-12 22:06:29
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sfb1020

金虫 (小有名气)


丫头7976(金币+1): 乙醇是干嘛用的 一般不都是用EDTA洗下来,再重新上镍吗?请指教 2011-10-19 07:55:55
每用一次就要再生一次,用一系列不同浓度的乙醇
7楼2011-10-18 12:46:50
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