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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[交流] 关于带his-tag的膜蛋白镍柱纯化

ni是与组氨酸残基中咪唑环结合，那么当带有高浓度的咪唑溶液洗脱时，咪唑与his-tag的咪唑环竞争结合ni,所有蛋白才会被洗脱下来，但是存在一个问题，咪唑完全跟ni结合了，第二次上样的时候，带his-tag的蛋白怎么跟镍柱结合呀，因为镍都被咪唑结合着，用什么方法再把咪唑洗脱下来呢？请各位高手指教！
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1楼 2011-10-12 17:43:54
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doublehelix

木虫 (著名写手)
★ ★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流，欢迎常来 2011-10-13 10:35:11
柱子需要再生，先变性，再经过一系列的洗脱等程序...
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5楼2011-10-12 23:18:56
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
丫头7976(金币+1): 灭菌水和乙醇能把镍洗干净吗，得用EDTA，把镍洗下来顺便就把咪唑洗下来了吧 2011-10-13 08:13:40
lstt09nk(金币+1): 鼓励参与 2011-10-13 10:35:26
分别用灭菌水和20%乙醇洗柱子若干次，让柱子再生。
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3楼2011-10-12 20:45:16
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lihuan0525

金虫 (职业作家)
★
丫头7976(金币+1):谢谢参与
再生后在过柱子吧
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4楼2011-10-12 22:06:29
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sfb1020

金虫 (小有名气)
丫头7976(金币+1): 乙醇是干嘛用的 一般不都是用EDTA洗下来，再重新上镍吗？请指教 2011-10-19 07:55:55
每用一次就要再生一次，用一系列不同浓度的乙醇
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7楼2011-10-18 12:46:50
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