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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化
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543608268

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于his-tagged 蛋白纯化

求助关于his-tagged 蛋白纯化（变性条件下） 怎样得到高纯度的目的蛋白 知识经验或专门文献

[ Last edited by 543608268 on 2011-1-19 at 14:02 ]
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1楼 2011-01-19 13:46:18
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ben1147

木虫 (正式写手)
543608268(金币+5): 2011-01-21 00:58:33
引用回帖:
Originally posted by henkally at 2011-01-19 13:54:30:
对，镍柱就好。
不过从我们实验室的经验来看，光是一个HIS标签，过下镍柱，很难做到电泳纯啊~

想只通过过镍柱就得到很高纯度的重组蛋白是不现实的，毕竟组氨酸也是正常蛋白质的组成成分，吸附、洗脱无非就是一个重组蛋白的His-tag和杂蛋白里的his残基竞争Ni2+的过程，从原理上就决定了这并不是一个高特异性的纯化方法，尤其是在重组蛋白诱导表达量并不高、与杂蛋白相比并不占绝对优势的情况下。
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6楼2011-01-20 19:55:09
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
543608268(金币+5): 2011-01-19 13:58:48
上样平衡后先用低浓度咪唑预洗脱，除去亲和力小的杂蛋白，然后高浓度咪唑洗脱下目标蛋白。
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2楼2011-01-19 13:49:42
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henkally

禁虫 (著名写手)
543608268(金币+5): 2011-01-19 13:58:27
本帖内容被屏蔽
3楼2011-01-19 13:54:30
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xhjggl

木虫 (正式写手)
543608268(金币+5): 2011-01-21 00:58:49
可以到上海生工网站上下载说明书啊！
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4楼2011-01-20 15:16:44
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