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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » RACE 3'基因pcr 泡出来的条带是100多bp!!!!到底是不是我的目的基因呀
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)

[求助] RACE 3'基因pcr 泡出来的条带是100多bp!!!!到底是不是我的目的基因呀

在做基因的3‘RACE  用持家基因PCR有结果 也就是cDNA模板没有问题 但是PCR3’RACE 的条带只有一条100多bp的条带。。。。囧。。。。到底是不是我的目的条带呀。。。。求大家指点我这个菜鸟
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1楼 2012-12-08 16:30:36
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gyesang

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9楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2012-12-09 16:42:56
要测的话就要连接T载体~   那个，我想问问你知不知道3‘RACE用的特异性引物是 R 还是F?~师姐跟我说是R 我个人觉得应该是F 呀...

你师姐说的是对的，用R
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10楼2012-12-09 17:34:15
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gyesang

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【答案】应助回帖

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yoyo单眼皮: 金币+4, ★有帮助 2012-12-08 20:47:31
这个需要设计引物进一步验证，在你RACE到的3‘端设计引物，以cDNA为模板做PCR验证
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2楼2012-12-08 20:39:58
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
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2楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-08 20:39:58
这个需要设计引物进一步验证，在你RACE到的3‘端设计引物，以cDNA为模板做PCR验证

你是说再设计一个3’端的特异性引物？？是这个意思么。
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3楼2012-12-08 20:47:08
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3楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2012-12-08 20:47:08
你是说再设计一个3’端的特异性引物？？是这个意思么。...

是的，在你RACE到的那段序列上设计
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4楼2012-12-08 21:02:55
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-08 21:02:55
是的，在你RACE到的那段序列上设计...

RACE到的那段序列是什么意思。。。。我懵了   是我现在特异引物上游的序列设计一个 特异性引物是么？
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5楼2012-12-08 21:42:26
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5楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2012-12-08 21:42:26
RACE到的那段序列是什么意思。。。。我懵了   是我现在特异引物上游的序列设计一个 特异性引物是么？...

你不是说你 PCR3’RACE 的条带只有一条100多bp的条带 吗？
难道还没有送测序？我说是在这一条100多bp的条带上设计引物
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yoyo单眼皮
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6楼2012-12-08 23:03:41
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yoyo单眼皮

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6楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-08 23:03:41
你不是说你 PCR3’RACE 的条带只有一条100多bp的条带 吗？
难道还没有送测序？我说是在这一条100多bp的条带上设计引物...

是要送去 但是一百多BP不能测 误差太大
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7楼2012-12-09 15:35:39
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7楼: Originally posted by yoyo单眼皮 at 2012-12-09 15:35:39
是要送去 但是一百多BP不能测 误差太大...

这个没有关系的，测了再说
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8楼2012-12-09 16:29:38
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yoyo单眼皮

铁虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by gyesang at 2012-12-09 16:29:38
这个没有关系的，测了再说...

要测的话就要连接T载体~   那个，我想问问你知不知道3‘RACE用的特异性引物是 R 还是F?~师姐跟我说是R 我个人觉得应该是F 呀
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9楼2012-12-09 16:42:56
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