24小时热门版块排行榜    

查看: 4344  |  回复: 9

anna87

新虫 (初入文坛)

[求助] 为什么菌液PCR的条带比目的基因小很多。 已有5人参与

目的基因1600多bp。切胶回收连PMD-18T载体,转化DH5α,挑白斑摇菌,做PCR,出现的条带在250bp左右,没有出现目的条带,为什么?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-16 21:57:30
没有转进去,空载PCR到的片段差不多是250bp左右
借你一生好不好
2楼2013-12-16 20:09:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-01-07 08:47:43
载体自连,多挑几个白斑,一般挑十个,这样就保险了。
我不会!
3楼2013-12-16 23:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anna87

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-12-16 20:09:08
没有转进去,空载PCR到的片段差不多是250bp左右

菌液PCR可以用自己的引物吗?还是要用通用引物,比如说PMD18-T,用M13?
4楼2013-12-19 10:38:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anna87

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-16 23:45:20
载体自连,多挑几个白斑,一般挑十个,这样就保险了。

挑了  还是没有,、
5楼2013-12-19 10:38:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

露水无痕

新虫 (初入文坛)

就是没转进去,重新连接转化   将平板放在4度里看有没有假阳性的 另外  破菌会好些
6楼2013-12-19 10:53:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by anna87 at 2013-12-19 10:38:14
菌液PCR可以用自己的引物吗?还是要用通用引物,比如说PMD18-T,用M13?...

可以用通用引物
借你一生好不好
7楼2013-12-19 11:10:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alicelchf

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:47:50
菌液pcr假阳性太多,不建议使用
之所以片段大小不对,因为你的模板就不干净了
修身、齐家、治国、平天下
8楼2014-01-03 17:00:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

生科院404

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2014-01-07 08:48:14
建议你再做一次转化,我之前转过一个150bp的基因试了三次才成功呢。
9楼2014-01-05 20:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxy1961

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-07 08:48:17
应该是连接效率不高,建议你选一个连接效率高的T4连接酶,天津强微特生物公司的连接酶就不错,还便宜。他们还有快连试剂盒,就是贵了点,不过效果真的不错,5分钟就都连上了。
10楼2014-01-06 16:22:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 anna87 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[论文投稿] 申请回稿延期一个月,编辑同意了。但系统上的时间没变,给编辑又写邮件了,没回复 10+3 wangf9518 2026-03-17 4/200 2026-03-19 23:55 by babero
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 梁成伟老师课题组欢迎你的加入 +9 一鸭鸭哟 2026-03-14 11/550 2026-03-19 17:22 by !本暗一次!
[考研] 321求调剂 +8 何润采123 2026-03-18 10/500 2026-03-19 16:46 by 何润采123
[考博] 东华理工大学化材专业26届硕士博士申请 +8 zlingli 2026-03-13 8/400 2026-03-19 16:32 by 轻松不少随
[考研] 281求调剂(0805) +9 烟汐忆海 2026-03-16 19/950 2026-03-19 11:42 by laoshidan
[考研] 本科郑州大学物理学院,一志愿华科070200学硕,346求调剂 +4 我不是一根葱 2026-03-18 4/200 2026-03-19 09:11 by 浮云166
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 302求调剂 +10 呼呼呼。。。。 2026-03-17 10/500 2026-03-18 12:45 by Linda Hu
[考研] 0854,计算机类招收调剂 +3 胡辣汤放糖 2026-03-15 6/300 2026-03-18 12:09 by 上岸上岸……..
[考研] 环境工程调剂 +8 大可digkids 2026-03-16 8/400 2026-03-18 09:36 by zhukairuo
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 中科院材料273求调剂 +4 yzydy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 15:59 by Gaodh_82
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历,论文在投 +7 腻腻gk 2026-03-14 7/350 2026-03-16 10:12 by houyaoxu
[考研] 22408总分284求调剂 +3 InAspic 2026-03-13 3/150 2026-03-15 11:10 by zhq0425
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 招收0805(材料)调剂 +3 18595523086 2026-03-13 3/150 2026-03-14 00:33 by 123%、
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
信息提示
请填处理意见