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小屁乖乖

铁虫 (初入文坛)

[求助] CBF1基因扩增出的电泳条带为什么不是一条带？

1、2、5、6、9这几个样用的pcr体系和程序和样3、4、7、8用的不一样。前者的带型上边有一条亮带，下边都是弥散状的；后者虽然只有一条带但太弱！
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1楼 2011-12-14 17:24:52
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fangni

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也做的CBF1,跟你的情况差不多，我也很想知道原因，有高手指点的话就太好了
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2楼2011-12-14 18:25:35
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xwr93207033

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-17 12:30:34
如果能确定是你要克隆的目标基因预期大小，把两条带的分别回收克隆、测序，有可能发现该CBF1基因家族新成员，出现两条带可能是该基因家族成员在进化过程中出现的缺失造成
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3楼2011-12-15 08:17:13
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小屁乖乖

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by xwr93207033 at 2011-12-15 08:17:13:
如果能确定是你要克隆的目标基因预期大小，把两条带的分别回收克隆、测序，有可能发现该CBF1基因家族新成员，出现两条带可能是该基因家族成员在进化过程中出现的缺失造成

之前做的是只有一条带的而且还非常清楚，但是做的早了不记得程序和体系了，现在就怎么做都没有以前的好了
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4楼2011-12-15 08:51:32
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小屁乖乖

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by fangni at 2011-12-14 18:25:35:
我也做的CBF1,跟你的情况差不多，我也很想知道原因，有高手指点的话就太好了

请问你用的体系和程序是什么?
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5楼2011-12-15 08:58:18
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通缉要饭

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
提高退火温度在跑跑看…可能是个基因家族哈……
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6楼2011-12-16 14:20:38
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henry520524

铁虫 (小有名气)
同样关心。。。我最关心的是CBF3
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人生如茶！
7楼2011-12-16 23:10:12
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wjs5123

铁虫 (初入文坛)
把你的引物到NCBI里面Blast，看是否具有扩增特异性，如果不具有特异性就可能出现这种情况。
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8楼2011-12-30 09:28:14
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wjs5123

铁虫 (初入文坛)
CBF1与CBF3具有高度同源性，如果你引物在两者的同源区域设计引物就会导致这种情况。
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9楼2011-12-30 09:29:47
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