应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 挑单克隆后，菌液PCR检测所有条带都偏小，目的条带没有出现
101/1返回列表
查看: 4120  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cxb-abc

银虫 (小有名气)

[交流] 挑单克隆后，菌液PCR检测所有条带都偏小，目的条带没有出现 已有7人参与

各位高手大家好，我最近做转化，Page胶回收片段在400bp左右，挑单克隆后PCR菌液目的条带没有出现，但在２５０ｂｐ左右出现一条带，不知何故？以下是我做的7个样，每个样挑3个单菌克隆，ＰＣＲ产物图片如下：

2012-9-22-11-08-37.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-09-27 21:42:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

无疆@行者

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
LZ可以拿出一两个，提取质粒，做一下酶切鉴定，如果酶切正常那么说明是对的，酶切不正常那肯定不对，不过一般来说PCR条带不对，阳性克隆的可能性很小
赞一下 回复此楼
2楼2012-09-27 23:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Frank王

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能没连接上，最好挑几个测序看看。
赞一下 回复此楼
3楼2012-09-28 09:53:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxb-abc

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 无疆@行者 at 2012-09-27 23:47:32
LZ可以拿出一两个，提取质粒，做一下酶切鉴定，如果酶切正常那么说明是对的，酶切不正常那肯定不对，不过一般来说PCR条带不对，阳性克隆的可能性很小

谢谢，我得PAGE胶放了有2个月了，老师说可能胶板上的微生物作用是原始DNA差异片段降解了，目前还没有跑出新版，待解决中
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-09-28 11:21:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-28 14:47:07
个人觉得，你老板说的可能性很小。
建议从切胶重新做。
1，切胶回收后请取几微升跑胶确定分子量是对的
2，分子量对再连接转化再涂平板
3，菌落PCR检测，用你的特异引物和通用引物一起来检测
赞一下 回复此楼
5楼2012-09-28 12:20:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ahsy

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
你老板说的不对，有可能没连接上，应该用你连接片段的引物进行PCR扩增验证一下。
赞一下 回复此楼
6楼2012-09-28 15:03:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小城大宝

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
应该是没连上的问题，跑出来的是载体。
赞一下 回复此楼
用你的笑容去改变这个世界，别让这个世界改变了你的笑容。
7楼2012-09-28 18:12:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
可能是没连接上或者切胶的问题 提取质粒做个质粒酶切和质粒PCR吧 然后再分析
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
8楼2012-09-29 16:08:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxb-abc

银虫 (小有名气)
page 胶新板跑出来后，回收，经PCR扩增后，原本350bp 左右的片段在1%琼脂糖胶上还是250 bp 以下，我该怎么办？
赞一下 回复此楼
9楼2012-10-10 09:47:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

crystalfrog

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
我的建议是你不要做菌落pcr了 ，挑三个菌摇一下，如果没有切出来就直接放弃，重新连接
赞一下 回复此楼
10楼2013-03-21 22:57:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cxb-abc 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 0XLacIJUOj8D 2026-08-24 3/150 2026-08-25 01:47 by BZKMTicpDhFj
[基金申请] 明天应该可查了！？ +5 chengyan1220 2026-08-23 5/250 2026-08-24 23:28 by 我4大白菜
[基金申请] 人气不行了 +10 fansofjerry 2026-08-21 10/500 2026-08-24 21:03 by zhanghaozhu
[基金申请] 我面上完蛋了 +9 且听虎啸 2026-08-20 10/500 2026-08-24 20:08 by 苦寒来香
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +21 koalala 2026-08-24 24/1200 2026-08-24 19:25 by 家与远方
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[基金申请] 今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +17 医学老男孩 2026-08-20 21/1050 2026-08-24 14:21 by refreshing11
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +4 process2012 2026-08-23 5/250 2026-08-23 19:58 by jurkat.1640
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +16 kkkl_v 2026-08-19 17/850 2026-08-22 16:12 by 阿布Abu
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 看来今天不会放榜了？ +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭