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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的
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jyfxmc

新虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的 已有2人参与

到底是怎么回事呢，我的目的条带1100左右 。marker分别为250 500 1000 1500 2000 2500，中间最亮的是我做的阳性对照，最后面的孔是阴性对照，连接的PMD18T ，PCR反应条件为94度 5min ，94度30秒  ，55度30秒，55度 1 min， 72度 7min。

菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的
4B8AECFB03AC266B9249AA930EEC268D.jpg


菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的-1
4B8AECFB03AC266B9249AA930EEC268D.jpg
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1楼 2014-03-21 10:14:50
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jyfxmc(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:42:48
都是非特异性条带，建议重新连接转化，或者从头开始，扩增时可以适当提高退火温度
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
2楼2014-03-21 10:26:23
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hg30717580

木虫 (职业作家)

总经理

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
jyfxmc(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:42:56
建议提高退火温度，减少延长时间。试试看
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突破自我，喜迎曙光
3楼2014-03-21 16:46:33
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jyfxmc

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 10:26:23
都是非特异性条带，建议重新连接转化，或者从头开始，扩增时可以适当提高退火温度

这种情况是没连上的可能性大，还是没有PCR出来的可能性大呢
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4楼2014-03-21 18:02:45
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jyfxmc

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 10:26:23
都是非特异性条带，建议重新连接转化，或者从头开始，扩增时可以适当提高退火温度

我后来提质粒，做了单酶切，发现条带比空载体序列要大，拿去测序，回来又发现是空载体和些其他序列，也不是我的目的片段，是怎么回事呢？
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5楼2014-03-21 18:05:51
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)
★
jyfxmc(gyesang代发): 金币+1, 鼓励回帖交流！ 2014-03-31 19:43:07
引用回帖:
5楼: Originally posted by jyfxmc at 2014-03-21 18:05:51
我后来提质粒，做了单酶切，发现条带比空载体序列要大，拿去测序，回来又发现是空载体和些其他序列，也不是我的目的片段，是怎么回事呢？...

你在双酶切前有进行PCR验证吗？没的话建议先验证一下，不过以你测序结果来看，建议重新来过
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植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
6楼2014-03-21 20:57:20
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