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jyfxmc

新虫 (小有名气)

[求助] 菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的 已有2人参与

到底是怎么回事呢,我的目的条带1100左右 。marker分别为250 500 1000 1500 2000 2500,中间最亮的是我做的阳性对照,最后面的孔是阴性对照,连接的PMD18T ,PCR反应条件为94度 5min ,94度30秒  ,55度30秒,55度 1 min, 72度 7min。

菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的
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菌液PCR为什么有杂带而且挺亮的-1
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hg30717580

木虫 (职业作家)

总经理

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jyfxmc(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 19:42:56
建议提高退火温度,减少延长时间。试试看
突破自我,喜迎曙光
3楼2014-03-21 16:46:33
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
jyfxmc(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流! 2014-03-31 19:42:48
都是非特异性条带,建议重新连接转化,或者从头开始,扩增时可以适当提高退火温度
植根于内心的修养;无需提醒的自觉;以约束为前提的自由;为别人着想的善良
2楼2014-03-21 10:26:23
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jyfxmc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 10:26:23
都是非特异性条带,建议重新连接转化,或者从头开始,扩增时可以适当提高退火温度

这种情况是没连上的可能性大,还是没有PCR出来的可能性大呢
4楼2014-03-21 18:02:45
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jyfxmc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-03-21 10:26:23
都是非特异性条带,建议重新连接转化,或者从头开始,扩增时可以适当提高退火温度

我后来提质粒,做了单酶切,发现条带比空载体序列要大,拿去测序,回来又发现是空载体和些其他序列,也不是我的目的片段,是怎么回事呢?
5楼2014-03-21 18:05:51
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