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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物
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芥末猫

银虫 (小有名气)

[求助] 原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物

原核表达pGEX-4T-1载体构建后，菌液pcr用什么引物？ 要合成pGEX-4T-1的通用引物？还是用我之前目的基因的引物？
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1楼2012-04-24 20:33:46
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

Pushing2012

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
就用目的基因引物就可以检测构建是否成功
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2楼2012-04-24 20:37:52
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普通回帖

芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Pushing2012 at 2012-04-24 20:37:52:
就用目的基因引物就可以检测构建是否成功

奥，谢谢
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3楼2012-04-24 21:17:39
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qjy_134

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-27 13:36:08
用载体的引物，用原来片段的引物会出来假阳性
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4楼2012-04-25 09:18:23
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+2, 专家考核 2012-04-25 13:50:23
一个载体上的引物，一个目的基因引物，注意一上一下游，假阳性的几率明显减小。
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5楼2012-04-25 10:39:23
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lxj341401 at 2012-04-25 10:39:23:
一个载体上的引物，一个目的基因引物，注意一上一下游，假阳性的几率明显减小。

如果这样做的话，是不是目的条带的长度是目的基因+载体的长度？？
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6楼2012-04-25 15:28:14
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芥末猫

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by qjy_134 at 2012-04-25 09:18:23:
用载体的引物，用原来片段的引物会出来假阳性

这个假阳性是什么意思？
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7楼2012-04-25 15:30:57
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
比如你用原来PCR（PCR产物）的引物，不加模板也会P出条带。。
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8楼2012-04-25 15:51:47
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 专家考核, 专家辛苦了 2012-04-27 13:36:38
引用回帖:
6楼: Originally posted by 芥末猫 at 2012-04-25 15:28:14:
如果这样做的话，是不是目的条带的长度是目的基因+载体的长度？？

不是，比目的基因的长度多一点，具体多多少要看用的哪个引物。
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9楼2012-04-25 18:42:23
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-27 13:36:50
提质粒 做酶切 最准确
先PCR鉴定 再提质粒 在酶切 在测序
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10楼2012-04-25 20:39:58
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