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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 存档旧帖 » 菌液PCR产物电泳图，怎么解释？
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oceanpig

铁虫 (小有名气)

[交流] 菌液PCR产物电泳图，怎么解释？ 已有10人参与

第一次做克隆实验，最后一步菌液PCR产物电泳图跑得结果有点失望。不知道是什么原因？望各位大侠指点一二

菌液PCR结果.jpg
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wcwluwei

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1楼 2012-09-20 15:51:13
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xw19880905

新虫 (小有名气)
★
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建议重新挑菌落培养，感觉你做的这个没有转化上，再试试吧
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2楼2012-09-20 15:57:47
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oceanpig

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xw19880905 at 2012-09-20 15:57:47
建议重新挑菌落培养，感觉你做的这个没有转化上，再试试吧

谢谢！没转化上的话，那我这出来的不纯的条带有可能就是引物扩增质粒上的片段了？
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3楼2012-09-20 16:02:34
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer
★
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筛选是蓝白斑+AMP？
一般来说假阳性都不太可能出现这样的条带……
建议楼主提了质粒，酶切看看，再不济重新做个转化.
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Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-09-20 16:37:34
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三撇五撇

银虫 (小有名气)
★
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这是有明显的杂带 和拖带现象啊 注意在pcr时的稍提高退火温度 和试试热启动
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5楼2012-09-20 23:12:39
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yc652090251

金虫 (小有名气)
★
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一定要确保挑出的菌是单菌落呀~~再就是避免基因污染以及上面说的那些。
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低调做人好么~~
6楼2012-09-20 23:21:23
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liujianmin68

木虫 (职业作家)

努力发展交叉学科
★
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你这里面倒是有一个条带比较亮，不知道你有没有做一个阴性对照，如果有的话，可以跟菌液pcr作对比，也基本可以判断是否已连上，祝好运
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转向地质微生物学
7楼2012-09-21 00:47:37
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yw999

木虫 (正式写手)
★
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没有marker、没有阳性对照。感觉全部都是阴性的，如果转化成功，应该会有很亮的条带，另外杂带也不会那么多
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8楼2012-09-21 08:24:51
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junminh

铜虫 (小有名气)
★
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看是否有你要的条带，另PCR条件优化下。
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9楼2012-09-21 08:39:33
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malstose

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
那么多的杂带，PCR加样的问题，再调节一下PCR反应体系吧。
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10楼2012-09-21 09:02:26
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