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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 【求助/交流】指导-pcr产物电泳后回收
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】指导-pcr产物电泳后回收 已有11人参与

我将pcr产物电泳后有2500（目的带）和1000（浓度低）的两条条带，将目的带割胶回收后在进行电泳，还能发现还有1000的带出现，请问是什么原因？

[ Last edited by 1949stone on 2011-1-5 at 16:51 ]
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1楼 2011-01-05 16:10:09
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susizheng

木虫 (著名写手)

我們是糖 甜到憂傷
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 16:50:49
又出“跪求”字眼了。
可能是Kit的原因，实验室有段时间也老出这个问题，回收后，要么出现一条较大的浅带，要么出现一条较小的浅带。不过不影响后续的实验。
可以将电泳时间延长，将条带分得比较开，避免切胶带来的影响。
赞一下(2人) 回复此楼
Thank-you，so-blue.
2楼2011-01-05 16:26:22
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
★
1949stone(金币+1):谢谢交流 2011-01-05 16:52:09
割胶是如果用的是高能紫外会不会导致dna连得某个位点断裂，从而导致这个结果？还有割胶的时候一般是用多少的紫外？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-01-05 16:33:50
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
还有电泳图上两个条带距离还是挺远的，电泳了1小时
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4楼2011-01-05 16:34:52
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1949stone

荣誉版主 (知名作家)

海纳百川
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2011-01-05 16:26:22:
又出“跪求”字眼了。
可能是Kit的原因，实验室有段时间也老出这个问题，回收后，要么出现一条较大的浅带，要么出现一条较小的浅带。不过不影响后续的实验。
可以将电泳时间延长，将条带分得比较开，避免切胶带 ...

跪求
编辑了
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海纳百川止于至善
5楼2011-01-05 16:51:54
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fykxy_206

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):鼓励交流 2011-01-05 18:18:40
这种情况应该是你的电泳液的问题，换换电泳液试试，原来的电泳液中可能含有你点样不小心撒到外面的PCR样品了。祝好运！
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-01-05 16:54:55
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天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
切胶切干净了吗？
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Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-01-05 17:16:51
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
本帖仅楼主可见
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8楼2011-01-05 18:50:38
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DH5a

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用1%的胶跑，电压跑80伏，就可以分开了
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9楼2011-01-05 19:36:45
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liaoyh

铁杆木虫 (正式写手)
rainwander:给个建议，像这种跟帖求助问题的，最好针对虫友采用“引用回复该贴”功能~~~ 2011-01-05 23:43:50
谢谢楼上各位的回答，但我还有一些疑问：1，如果是kit的问题的话，那我以前的胶回收也应该出现这样的问题的，难道kit也被污染了？2，如果是电泳液的问题的话，那不应该只在点了样的泳道里出现杂带，是吗？3，两条带相差较大，电泳1h后分开较远，切胶的刀有段时间没用了，那么应该没有以前的残留吧？
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2011-01-05 21:12:36
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