应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】可不可以不构建载体
101/1返回列表
查看: 1990  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

痴书小孩

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】可不可以不构建载体 已有9人参与

请问大家，为什么要构建载体啊，我可不可以跑完PCR，电泳后回收直接拿去测序，为什么连到质粒上还要转到大肠杆菌里面去？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-26 08:58:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

周_yan

木虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-26 09:24:01
我认为电泳回收后可以直接测序，而连入T载体再去测序一是为了测序更容易；二是方便后面构建表达载体。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2010-08-26 09:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-26 09:27:26
把你回收的产物和你pcr的引物一起送去测，我觉得是可以的~~
只是这样回收产物不是很好保存吧~~
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-08-26 09:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
二楼说的很对，如果后续要做表达研究的话，是克隆载体测序较好；
如果是仅仅是为了获得部分序列信息的话，不需要克隆，PCR产物直接测序即可
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-08-26 11:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xppcomeon
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
支持2楼
5楼2010-08-26 11:06:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banhf

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):学问好啊 2010-08-26 15:06:47
PCR产物可以用来测序，但必须经过纯化。
将PCR产物连接至载体测序有两个目的：1 用载体上的通用引物测序可以保证测序质量；2 可以将PCR产物的整个序列全部测出。直接用PCR产物来测序可能会由于PCR引物不适合测序，与模板结合不好等原因而导致测序失败，而且即使测序成功了那PCR产物两端至少各50bp的序列是测不到的。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-08-26 13:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
★ ★ ★
1949stone(金币+3):好细致 2010-08-26 15:06:58
纠正一下：

PCR产物直接测序才能反应原始模板的序列情况

克隆到载体里边是为了要这段序列得以保存，并能够大量的保真性复制，以便于后期的基因组和蛋白质组学的研究

也就是说，如果克隆到载体，一定要首先知道这段序列的确切的碱基组成，把一个未知基因未经PCR产物测序就拿去克隆是不科学不可信的

因为PCR产物是一个含有少量突变的综合体，不管是用什么酶

而测序正好反应的就是全部的碱基信号，少量突变不会影响

这些突变一旦克隆到载体再测序就改变了对原始模板的认识

这就是为什么一般挑克隆去测序都要多挑几个，就是为了防止突变
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2010-08-26 13:39:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

痴书小孩

铁杆木虫 (小有名气)
I see,只不过我是要做植物病毒检测的，就是设计引物跑PCR然后测序啦，又不搞转基因，怎么看到的文献全部都构建载体的，没有直接测序的，真奇怪...
赞一下 回复此楼
8楼2010-08-27 08:19:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

diana0423

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-27 20:37:58
直接测序的话两端会有一些碱基序列是测不准的
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2010-08-27 20:09:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tiani_tan

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
用载体测序的话，一般就是简单的TA克隆，也不是很麻烦，而直接用PCR产物的话需要纯化，还有降解的可能
赞一下(1人) 回复此楼
10楼2010-08-27 21:37:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 痴书小孩 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +9 majunge000 2026-08-11 11/550 2026-08-15 23:20 by botar
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 静等基金结果 +8 gjjjzhong 2026-08-10 21/1050 2026-08-13 17:56 by 且听虎啸
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分？ +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭