24小时热门版块排行榜    

查看: 1994  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

痴书小孩

铁杆木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】可不可以不构建载体 已有9人参与

请问大家,为什么要构建载体啊,我可不可以跑完PCR,电泳后回收直接拿去测序,为什么连到质粒上还要转到大肠杆菌里面去?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

banhf

新虫 (初入文坛)

★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
1949stone(金币+2):学问好啊 2010-08-26 15:06:47
PCR产物可以用来测序,但必须经过纯化。
将PCR产物连接至载体测序有两个目的:1 用载体上的通用引物测序可以保证测序质量;2 可以将PCR产物的整个序列全部测出。直接用PCR产物来测序可能会由于PCR引物不适合测序,与模板结合不好等原因而导致测序失败,而且即使测序成功了那PCR产物两端至少各50bp的序列是测不到的。
6楼2010-08-26 13:12:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

周_yan

木虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):感谢交流~~ 2010-08-26 09:24:01
我认为电泳回收后可以直接测序,而连入T载体再去测序一是为了测序更容易;二是方便后面构建表达载体。
2楼2010-08-26 09:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)

★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励回答 2010-08-26 09:27:26
把你回收的产物和你pcr的引物一起送去测,我觉得是可以的~~
只是这样回收产物不是很好保存吧~~
3楼2010-08-26 09:23:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
二楼说的很对,如果后续要做表达研究的话,是克隆载体测序较好;
如果是仅仅是为了获得部分序列信息的话,不需要克隆,PCR产物直接测序即可
4楼2010-08-26 11:05:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +31 医学老男孩 2026-08-13 70/3500 2026-08-16 08:29 by 医学老男孩
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +10 majunge000 2026-08-11 12/600 2026-08-16 08:18 by xli1984
[精细化工] 招聘 金属平磨液,抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +12 archvillain 2026-08-15 23/1150 2026-08-15 20:47 by foyo404
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +12 Tide man 2026-08-10 13/650 2026-08-15 16:34 by 氺木
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜? +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +10 majunge000 2026-08-10 13/650 2026-08-15 12:26 by hanpeng972
[基金申请] 各位道友,我要去昆明玩几天,回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了,可是同事的操作让我实在接受不了,怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
信息提示
请填处理意见