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wkl1984

金虫 (小有名气)


[交流] 【求助/交流】构建问题

在载体上有bsgI和NotI,相距13bp的碱基,在这2者中间再加入ApaLI的酶切位点,利用PCR做的话,引物如何设计?因为BsgI的酶切位点为GTGCAG(N)15,不知道怎么设计引物。想各位求助
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wkl1984(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-04-10 00:46:08
楼主可以采用加Linker的方法引入新的酶切位点,合成寡核苷酸单链引物后,退火成双链再与载体连接即可。
2楼2011-04-09 22:37:35
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wkl1984

金虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-04-09 22:37:35:
楼主可以采用加Linker的方法引入新的酶切位点,合成寡核苷酸单链引物后,退火成双链再与载体连接即可。

我没有做过,但是加Linker的话,不是很好加,引物对繁多,而且连接上不是很容易,我想先PCR加入酶切位点,以后就直接用克隆序贯比较容易一点。这只是这么说说,不知道可不可以提供一些参考呢
3楼2011-04-10 12:59:00
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★ ★ ★ ★
wkl1984(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 细心,热心的空谷幽风~ 2011-04-11 14:19:34
引用回帖:
Originally posted by wkl1984 at 2011-04-09 21:59:47:
在载体上有bsgI和NotI,相距13bp的碱基,在这2者中间再加入ApaLI的酶切位点,利用PCR做的话,引物如何设计?因为BsgI的酶切位点为GTGCAG(N)15,不知道怎么设计引物。想各位求助

我查的是BsgI在识别序列后面第14个碱基处进行切割,这个酶切位点正好在你的NotI位点里(两者酶切位点重合了),这样双酶切是无法完成的,所以请你考虑换个酶切位点吧
4楼2011-04-11 13:47:32
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