应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】构建问题
51/1返回列表
查看: 540  |  回复: 3
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

wkl1984

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】构建问题

在载体上有bsgI和NotI，相距13bp的碱基，在这2者中间再加入ApaLI的酶切位点，利用PCR做的话，引物如何设计？因为BsgI的酶切位点为GTGCAG（N）15，不知道怎么设计引物。想各位求助
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-04-09 21:59:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

空谷幽风

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
wkl1984(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 细心，热心的空谷幽风~ 2011-04-11 14:19:34
引用回帖:
Originally posted by wkl1984 at 2011-04-09 21:59:47:
在载体上有bsgI和NotI，相距13bp的碱基，在这2者中间再加入ApaLI的酶切位点，利用PCR做的话，引物如何设计？因为BsgI的酶切位点为GTGCAG（N）15，不知道怎么设计引物。想各位求助

我查的是BsgI在识别序列后面第14个碱基处进行切割，这个酶切位点正好在你的NotI位点里（两者酶切位点重合了），这样双酶切是无法完成的，所以请你考虑换个酶切位点吧
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-04-11 13:47:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答

blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
wkl1984(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-04-10 00:46:08
楼主可以采用加Linker的方法引入新的酶切位点，合成寡核苷酸单链引物后，退火成双链再与载体连接即可。
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-04-09 22:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wkl1984

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by blackrose8089 at 2011-04-09 22:37:35:
楼主可以采用加Linker的方法引入新的酶切位点，合成寡核苷酸单链引物后，退火成双链再与载体连接即可。

我没有做过，但是加Linker的话，不是很好加，引物对繁多，而且连接上不是很容易，我想先PCR加入酶切位点，以后就直接用克隆序贯比较容易一点。这只是这么说说，不知道可不可以提供一些参考呢
赞一下 回复此楼
3楼2011-04-10 12:59:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 4 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭