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wkl1984

金虫 (小有名气)

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[交流] 【求助/交流】构建问题

在载体上有bsgI和NotI，相距13bp的碱基，在这2者中间再加入ApaLI的酶切位点，利用PCR做的话，引物如何设计？因为BsgI的酶切位点为GTGCAG（N）15，不知道怎么设计引物。想各位求助

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1楼 2011-04-09 21:59:47

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空谷幽风

金虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
wkl1984(金币+1):谢谢参与
西瓜(金币+3): 细心，热心的空谷幽风~ 2011-04-11 14:19:34

引用回帖:

Originally posted by wkl1984 at 2011-04-09 21:59:47:
在载体上有bsgI和NotI，相距13bp的碱基，在这2者中间再加入ApaLI的酶切位点，利用PCR做的话，引物如何设计？因为BsgI的酶切位点为GTGCAG（N）15，不知道怎么设计引物。想各位求助

我查的是BsgI在识别序列后面第14个碱基处进行切割，这个酶切位点正好在你的NotI位点里（两者酶切位点重合了），这样双酶切是无法完成的，所以请你考虑换个酶切位点吧