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关于SiRNA表达载体构建的问题
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请各位高人指点一下，我在构建SiRNA表达载体时遇到一个问题，在酶切空载体凝胶电泳胶回收纯化后，线性载体与目的片段按1:10的比例进行连接，转化DH5a感受态细菌后，在含卡那霉素的培养板上能够长出多个单菌落，但是每次提取质粒鉴定时，所提取的质粒远大于8.8Kb左右的目的质粒（见图）。做了很多次都是这样，很郁闷，只有一次构建成功并测序正确。所用的试剂盒：Sfi-I限制性内切酶、T4连接酶为NEB,胶回收纯化试剂盒为PROMEGA。 望各位高人指点，不胜感激！  |
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