应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 关于SiRNA表达载体构建的问题
51/1返回列表
查看: 3062  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

dxhly

铜虫 (初入文坛)

[求助] 关于SiRNA表达载体构建的问题

请各位高人指点一下，我在构建SiRNA表达载体时遇到一个问题，在酶切空载体凝胶电泳胶回收纯化后，线性载体与目的片段按1:10的比例进行连接，转化DH5a感受态细菌后，在含卡那霉素的培养板上能够长出多个单菌落，但是每次提取质粒鉴定时，所提取的质粒远大于8.8Kb左右的目的质粒（见图）。做了很多次都是这样，很郁闷，只有一次构建成功并测序正确。所用的试剂盒：Sfi-I限制性内切酶、T4连接酶为NEB,胶回收纯化试剂盒为PROMEGA。

望各位高人指点，不胜感激！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
欢迎欢迎！
1楼 2011-08-21 20:15:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

qincaifan

新虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
wanhscn(金币+4): 鼓励新虫！鼓励交流！ 2011-09-23 09:16:29
我也出现过这样的情况。可能是质粒污染吧，再重做一次试试
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-09-23 09:12:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
dhd997(金币+2): 您的意见呢？ 2011-08-22 12:05:11
dxhly(金币+2): 2011-08-29 23:28:03
只用了一个酶切位点的话质粒自连的几率比较大，情况也比较复杂。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-22 09:57:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dxhly

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-08-22 09:57:43:
只用了一个酶切位点的话质粒自连的几率比较大，情况也比较复杂。

是双酶切位点
回复此楼
欢迎欢迎！
3楼2011-08-25 23:20:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rengang666

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
西瓜(金币+1): 鼓励应助 2011-08-26 17:12:34
dxhly(金币+2): 2011-08-29 23:28:12
估计是载体污染了，你再重新鉴定一下原载体，重新划线！！
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2011-08-26 10:47:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:24 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-14 17:48 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 15:09 by Aj1rhIDL5ixY
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 3/150 2026-09-14 14:57 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭