应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】连接转化，帮帮忙
101/1返回列表
查看: 1543  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一笑35

铁虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】连接转化，帮帮忙 已有6人参与

最近几天一直在做真菌的连接转化，大约500bp左右的目的片段，可是转化后涂到板上的菌长的都特别小（包括阳性对照），看着很不正常，而且摇菌液测序结果也是信号弱，
   感受态用的是买DH5a，10微升的体系加入5微升目的片段
   

   不知道是什么原因，请大家帮着分析一下，谢谢啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
努力学习，充实自己！
1楼 2010-09-03 11:01:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuyan225

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我做转化也遇到过这种问题，感受态和DNA的量减少一点，在重新连试试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2010-09-03 11:53:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
amisking(金币+3):鼓励交流！ 2010-09-03 21:55:10
楼主做真菌的转化为什么用DH5a这种大肠杆菌感受态细胞呢？

菌落长的小说明它生长力弱了，一般DH5a生长16h以内就可以摇菌做菌落PCR鉴定了，如果16h还没长好80%的可能是感受态细胞过期了或保存条件不好。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2010-09-03 12:07:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cheo163

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
感觉相比较目的片段的量，你的DH5少了，把量加大一点~~
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2010-09-03 12:57:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一笑35

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by 怎么都行 at 2010-09-03 12:07:00:
楼主做真菌的转化为什么用DH5a这种大肠杆菌感受态细胞呢？

菌落长的小说明它生长力弱了，一般DH5a生长16h以内就可以摇菌做菌落PCR鉴定了，如果16h还没长好80%的可能是感受态细胞过期了或保存条件不好。

那连接真菌应该用什么样的感受态呢？我以为跟细菌一样都可以用DH5a呢。
赞一下 回复此楼
努力学习，充实自己！
5楼2010-09-03 14:26:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

magician13

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
什么叫连接真菌呢...是在大肠杆菌中构建适用于真菌的穿梭载体,还是要把现有的载体转到真菌中?
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2010-09-03 15:20:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一笑35

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
Originally posted by magician13 at 2010-09-03 15:20:49:
什么叫连接真菌呢...是在大肠杆菌中构建适用于真菌的穿梭载体,还是要把现有的载体转到真菌中?

我是说要连接到载体上的目的片段是真菌DNA，可不可以用DH5a感受态细胞
赞一下 回复此楼
努力学习，充实自己！
7楼2010-09-03 16:02:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

怎么都行

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我是说要连接到载体上的目的片段是真菌DNA，可不可以用DH5a感受态细胞 [/quote]
原来是这个意思，当然可以
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-09-03 20:39:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
菌落长的怎么样先别管，提质粒酶切试试嘛
赞一下(1人) 回复此楼
一直向前！
9楼2010-09-04 15:39:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一笑35

铁虫 (初入文坛)
O了，我重新再试试，感谢各位回帖。。。
赞一下 回复此楼
努力学习，充实自己！
10楼2010-09-05 09:11:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 一笑35 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭