应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » T克隆请教
51/1返回列表
查看: 955  |  回复: 4
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 2 个 MolEPI ，点击这里进行查看

madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢
1楼 2011-08-21 08:42:25
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

madengyu(金币+2): 2011-08-21 09:42:49
1949stone(MolEPI+1): 鼓励分享经验 2011-08-21 14:35:46
从你连接之后跑的胶来看，那一条条带可能是T载体，因为它和你的扩增片段仅差100多，从胶上你是看不到这么小的差别的，那么可能的原因就是你的片段太少。
另外，我认为要确保你的实验顺利，有必要做多一些你的片段，在连接之前先取一部分跑胶检测一下，确实得到很多的片段，一般连接的时候，是片段多于载体，以减少自连；连接之后一般直接跑胶检测也是看不到连接好的载体+片段，因为量太少了，只有经过转化后的大肠杆菌内的缺刻连接成环然后再扩增好多倍，而去除不成环的片段这样的筛选，才能在提质粒时检测出来。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-08-21 09:21:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

madengyu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2011-08-21 09:44:55
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

anlewo7777

木虫 (正式写手)
当然要做一下才甘心了，费这么大力气做出来，不进行完怎么甘心啊
如果挑不到转化子，那就重新来了
赞一下 回复此楼
4楼2011-08-21 17:48:09
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huaren125

禁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-21 19:46:36
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 有道理，学习了！ 2011-08-21 20:39:36
你好，我觉得你做TA克隆没必要在连接完再跑电泳验证，原因有两个，一、如果有连接好的重组质粒是环状的，跑电泳也看不出来到底有多大；二、其实TA克隆连接好的重组质粒占的比例较少，跑电泳不一定能看出来，看见的不见的就是它。一般做完连接就直接转化。我做转化是16度2个小时，4度过夜，之后直接转化大肠。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-08-21 19:01:31
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 madengyu 的主题更新
51/1返回列表
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭