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madengyu

禁虫 (小有名气)
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【分子生物】EPI帖

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1楼 2011-08-21 08:42:25
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anlewo7777

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

madengyu(金币+2): 2011-08-21 09:42:49
1949stone(MolEPI+1): 鼓励分享经验 2011-08-21 14:35:46
从你连接之后跑的胶来看，那一条条带可能是T载体，因为它和你的扩增片段仅差100多，从胶上你是看不到这么小的差别的，那么可能的原因就是你的片段太少。
另外，我认为要确保你的实验顺利，有必要做多一些你的片段，在连接之前先取一部分跑胶检测一下，确实得到很多的片段，一般连接的时候，是片段多于载体，以减少自连；连接之后一般直接跑胶检测也是看不到连接好的载体+片段，因为量太少了，只有经过转化后的大肠杆菌内的缺刻连接成环然后再扩增好多倍，而去除不成环的片段这样的筛选，才能在提质粒时检测出来。
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2楼2011-08-21 09:21:53
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madengyu

禁虫 (小有名气)
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3楼2011-08-21 09:44:55
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anlewo7777

木虫 (正式写手)
当然要做一下才甘心了，费这么大力气做出来，不进行完怎么甘心啊
如果挑不到转化子，那就重新来了
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4楼2011-08-21 17:48:09
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huaren125

禁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
amisking(金币+2): 鼓励应助 2011-08-21 19:46:36
西瓜(金币+3, MolEPI+1): 有道理，学习了！ 2011-08-21 20:39:36
你好，我觉得你做TA克隆没必要在连接完再跑电泳验证，原因有两个，一、如果有连接好的重组质粒是环状的，跑电泳也看不出来到底有多大；二、其实TA克隆连接好的重组质粒占的比例较少，跑电泳不一定能看出来，看见的不见的就是它。一般做完连接就直接转化。我做转化是16度2个小时，4度过夜，之后直接转化大肠。
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2011-08-21 19:01:31
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