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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 这样的电泳图片是否代表PCR扩增成功了？
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danyzj01

银虫 (正式写手)

[求助] 这样的电泳图片是否代表PCR扩增成功了？

这是提取DNA后粗跑的电泳，1%胶，30min

提取DNA后粗跑的电泳，2%胶，30min

PCR后跑的电泳，2%胶，30min

提取DNA后粗跑的电泳，1%胶，30min



提取DNA后粗跑的电泳，2%胶，30min



PCR后跑的电泳，2%胶，30min
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1楼 2012-04-26 21:29:29
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回帖置顶 ( 共有3个 )

danyzj01

银虫 (正式写手)
西瓜: 回帖置顶 2012-04-27 21:06:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-26 22:09:59:
PCR产物应该有多大？提的是基因组DNA吗？
产物的带很亮也很特异，大小对的话应该就是啦。
今天有事，明天再关注啦

以下这两张图，MARKER左边的是粗提的DNA，右边是PCR后，第一张是600BP的MARKER，第二张是2000BP的，但是拍照的仪器出了点问题，下半部分完全笼罩在黑暗中，不知道是什么原因？

600BP



2000BP
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8楼2012-04-27 20:44:34
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danyzj01

银虫 (正式写手)
西瓜: 回帖置顶 2012-04-27 21:06:46
对了，后上传的第二张图中，左边和右边用的是不同的染料，左边第一个是粗提DNA，第二个是PCR产物，右边也是如此

另外，MARKER最小的那条100BP的带那里好像隐约还有一排什么条带，是污染吗？还是
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9楼2012-04-27 20:47:01
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danyzj01

银虫 (正式写手)
danyzj01: 回帖置顶 2012-04-28 21:46:34
引用回帖:
16楼: Originally posted by liangxiuyan at 2012-04-28 08:36:43:
按原理来说，应当确定你要的提取基因片段大小，然后根据marker才能确定成功与否

将PCR产物直接进行第二次PCR，结果引物剩那么多，是怎么回事？
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17楼2012-04-28 21:46:26
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danyzj01

银虫 (正式写手)
对了，都是同一个菌株的DNA，只是不同的平行管，提取方法是一样的
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2楼2012-04-26 21:30:39
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 西瓜斑斑W5 2012-04-27 11:57:25
你的maker条带是多大的？PCR条带看起来跟粗提的DNA条带位置差不多……楼主最好把你提的DNA以及PCR产物放在一张图上。而且maker选得也不合适，条带都没在maker范围内呢。
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3楼2012-04-26 21:55:55
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-26 21:55:55:
你的maker条带是多大的？PCR条带看起来跟粗提的DNA条带位置差不多……楼主最好把你提的DNA以及PCR产物放在一张图上。而且maker选得也不合适，条带都没在maker范围内呢。

MARKER是600BP最大600、500、400、300、200、100
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4楼2012-04-26 22:02:50
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)
PCR产物应该有多大？提的是基因组DNA吗？
产物的带很亮也很特异，大小对的话应该就是啦。
今天有事，明天再关注啦
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5楼2012-04-26 22:09:59
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danyzj01

银虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-26 22:09:59:
PCR产物应该有多大？提的是基因组DNA吗？
产物的带很亮也很特异，大小对的话应该就是啦。
今天有事，明天再关注啦

是基因组DNA，那就是扩增成功了吗，多大就不知道了，这是不知名的菌株，还要等做鉴定才知道，但是不知道扩增成功了没
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6楼2012-04-26 22:33:05
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jimmy7633

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-27 21:07:49
PCR产物大小你肯定知道，Marker大小你也知道，比较一下产物大小就行。
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7楼2012-04-27 20:16:13
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西瓜

荣誉版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
8楼: Originally posted by danyzj01 at 2012-04-27 20:44:34:
以下这两张图，MARKER左边的是粗提的DNA，右边是PCR后，第一张是600BP的MARKER，第二张是2000BP的，但是拍照的仪器出了点问题，下半部分完全笼罩在黑暗中，不知道是什么原因？
44/cc/1725610_1335530652_143.jpg ...

那PCR应该是ok了。你的EB是加在胶里的吧？EB在电场中，移动的方向跟DNA相反，也就是向着样品孔。所以经过一段时间电泳之后，胶的下半部分EB含量就少了，所以看起来就黑一些。
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10楼2012-04-27 21:09:19
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