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danyzj01

银虫 (正式写手)

[求助] 这样的电泳图片是否代表PCR扩增成功了?

这是提取DNA后粗跑的电泳,1%胶,30min

提取DNA后粗跑的电泳,2%胶,30min

PCR后跑的电泳,2%胶,30min

提取DNA后粗跑的电泳,1%胶,30min



提取DNA后粗跑的电泳,2%胶,30min



PCR后跑的电泳,2%胶,30min
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danyzj01

银虫 (正式写手)

对了,都是同一个菌株的DNA,只是不同的平行管,提取方法是一样的
2楼2012-04-26 21:30:39
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danyzj01

银虫 (正式写手)

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3楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-26 21:55:55:
你的maker条带是多大的?PCR条带看起来跟粗提的DNA条带位置差不多……楼主最好把你提的DNA以及PCR产物放在一张图上。而且maker选得也不合适,条带都没在maker范围内呢。

MARKER是600BP最大600、500、400、300、200、100
4楼2012-04-26 22:02:50
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danyzj01

银虫 (正式写手)

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5楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-26 22:09:59:
PCR产物应该有多大?提的是基因组DNA吗?
产物的带很亮也很特异,大小对的话应该就是啦。
今天有事,明天再关注啦

是基因组DNA,那就是扩增成功了吗,多大就不知道了,这是不知名的菌株,还要等做鉴定才知道,但是不知道扩增成功了没
6楼2012-04-26 22:33:05
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danyzj01

银虫 (正式写手)

西瓜: 回帖置顶 2012-04-27 21:06:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-26 22:09:59:
PCR产物应该有多大?提的是基因组DNA吗?
产物的带很亮也很特异,大小对的话应该就是啦。
今天有事,明天再关注啦

以下这两张图,MARKER左边的是粗提的DNA,右边是PCR后,第一张是600BP的MARKER,第二张是2000BP的,但是拍照的仪器出了点问题,下半部分完全笼罩在黑暗中,不知道是什么原因?

600BP



2000BP

8楼2012-04-27 20:44:34
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danyzj01

银虫 (正式写手)

西瓜: 回帖置顶 2012-04-27 21:06:46
对了,后上传的第二张图中,左边和右边用的是不同的染料,左边第一个是粗提DNA,第二个是PCR产物,右边也是如此

另外,MARKER最小的那条100BP的带那里好像隐约还有一排什么条带,是污染吗?还是
9楼2012-04-27 20:47:01
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danyzj01

银虫 (正式写手)

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10楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-27 21:09:19:
那PCR应该是ok了。你的EB是加在胶里的吧?EB在电场中,移动的方向跟DNA相反,也就是向着样品孔。所以经过一段时间电泳之后,胶的下半部分EB含量就少了,所以看起来就黑一些。

是GOLDEN VIEW,应该都是一样的吧,那就不是仪器的镜头脏什么的吧
12楼2012-04-27 21:36:47
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danyzj01

银虫 (正式写手)

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11楼: Originally posted by 西瓜 at 2012-04-27 21:12:18:
100bp左右是剩余的没有进到产物里面的引物。引物虽然是单链,但是会 形成局部二级结构,也是可以被染色的。另外也可能是引物二聚体。这种现象是很常见的,几乎每次PCR都会有,不用太介意的。

我也不知道提的这个基因组大概是什么,也没有设计引物,是借别人的引物随机试跑看看的,没想到真的成功了,会不会太巧了,应该不存在使用不当的引物而造成扩增的基因组不完整或者是错误吧?
13楼2012-04-27 21:42:54
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danyzj01

银虫 (正式写手)

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14楼: Originally posted by honinglee at 2012-04-27 21:50:25:
基本上确定是扩增出东西来了。但是不是你需要的目的条带就不得而知了。楼主可以多扩增几个循环,产物量大一些,回收后连个T载测个序看看是不是你要的就知道了。条带大小1800左右?2000bp的那张图的PCR扩增条带和6 ...

忘记说了,600BP那个是2.5%的胶,跑了30分钟,2000BP的是1%的胶,跑了20分钟
15楼2012-04-27 22:05:25
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danyzj01

银虫 (正式写手)

danyzj01: 回帖置顶 2012-04-28 21:46:34
引用回帖:
16楼: Originally posted by liangxiuyan at 2012-04-28 08:36:43:
按原理来说,应当确定你要的提取基因片段大小,然后根据marker才能确定成功与否

将PCR产物直接进行第二次PCR,结果引物剩那么多,是怎么回事?


17楼2012-04-28 21:46:26
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