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whoisthis

铁虫 (小有名气)

[求助] 提取质粒之后又三条带, 需要切胶回收未开环DNA再进行酶切吗?

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1楼 2013-01-15 16:37:02
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yesali

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+3, 鼓励发帖交流问题。 2013-01-15 20:45:04
出现三条带是因为有质粒不同的构象，如超螺旋等，没必要且较回收。
即使切胶回收了，再跑电泳也还是三条带。
先做酶切试试吧
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2楼2013-01-15 16:40:53
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whoisthis

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yesali at 2013-01-15 16:40:53
出现三条带是因为有质粒不同的构象，如超螺旋等，没必要且较回收。
即使切胶回收了，再跑电泳也还是三条带。
先做酶切试试吧

我的意思是,要不要去掉开环线性DNA?
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3楼2013-01-15 19:31:36
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Renavatio

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我们都是直接提了质粒之后直接做酶切，不需要去除线性的
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Undefined！
4楼2013-01-15 20:47:19
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xiaoweiwei121

荣誉版主 (文坛精英)

这潭水蓝的深邃

优秀区长优秀区长优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不需要胶回收
直接酶切！
一直都是这么做的
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5楼2013-01-16 07:49:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是直接做酶切的。理论上超螺旋构象的质粒最好，去掉开环和线性的可以提高酶切产物的完整性。不过，事实上没人去做纯化回收。
如果你的质粒不是很大，提质粒时出现三条带的话可能是操作上太剧烈了。
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6楼2013-01-16 09:28:21
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by whoisthis at 2013-01-15 19:31:36
我的意思是,要不要去掉开环线性DNA?...

说实话，线性开环的真不多，就算有转化后也不会起作用。
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7楼2013-01-16 11:02:05
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haiwoshishui

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
大家都是直接酶切啊，没听说还要跑个电泳回收的。
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8楼2013-01-16 11:09:33
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yipinyoulan

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
完全不用胶回收，直接酶切
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9楼2013-01-17 10:45:12
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23ct

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得不需要，可以直接酶切。
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10楼2013-01-17 13:40:03
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