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emmaya

新虫 (初入文坛)

[求助] RED重组敲除基因,PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带 已有4人参与

如题,欲敲除的是大肠杆菌K-12的C600分子伴侣GroEL基因,大小约为1700bp。用RED重组方法,电转入两边各带50bp同源臂的线性片段(大小约1100bp)后,对筛选出来的疑似敲除菌株抽基因组PCR验证。

引物为目的基因5’、3’端,扩增出来的条带有两条,既有没敲掉的原基因大小,也有线性片段的条带。

在目的基因上游和线性片段中间设计的一对引物,则只有一条带,且大小正确,理论上来讲线性片段应该交换到基因组上了;

对目的基因非同源臂部分,设计了一对引物,疑似敲除的菌株与原始菌扩增出来的条带大小一样,说明目的基因还在。

想请教,这个情况到底是为什么呢,怎么会两种情况同时出现,不是应该要么线性片段交换上要么没有吗?

不知道问题出在哪里,有没有大牛有相似的经历的,什么办法可以解决呢?求给点意见!
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韩蕾6862

新虫 (初入文坛)

你现在找到原因了吗?我也遇到了相同的问题
7楼2014-11-29 16:14:07
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