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RED重组敲除基因,PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
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emmaya
新虫
(初入文坛)
应助: 0
(幼儿园)
金币: 923.8
帖子: 27
在线: 51小时
虫号: 2621197
注册: 2013-08-28
性别:
MM
专业: 生物大分子结构与功能
[
求助
]
RED重组敲除基因,PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已有4人参与
如题,欲敲除的是大肠杆菌K-12的C600分子伴侣GroEL基因,大小约为1700bp。用RED重组方法,电转入两边各带50bp同源臂的线性片段(大小约1100bp)后,对筛选出来的疑似敲除菌株抽基因组PCR验证。
引物为目的基因5’、3’端,扩增出来的条带有两条,既有没敲掉的原基因大小,也有线性片段的条带。
在目的基因上游和线性片段中间设计的一对引物,则只有一条带,且大小正确,理论上来讲线性片段应该交换到基因组上了;
对目的基因非同源臂部分,设计了一对引物,疑似敲除的菌株与原始菌扩增出来的条带大小一样,说明目的基因还在。
想请教,这个情况到底是为什么呢,怎么会两种情况同时出现,不是应该要么线性片段交换上要么没有吗?
不知道问题出在哪里,有没有大牛有相似的经历的,什么办法可以解决呢?求给点意见!
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1楼
2014-03-27 09:49:15
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韩蕾6862
新虫
(初入文坛)
应助: 0
(幼儿园)
金币: 13
帖子: 4
在线: 20.9小时
虫号: 758131
注册: 2009-04-26
专业: 生物化学
你现在找到原因了吗?我也遇到了相同的问题
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7楼
2014-11-29 16:14:07
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