| 查看: 2395 | 回复: 9 | |||
swallow52u银虫 (正式写手)
|
[求助]
PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有
|
|
我是做的RT-PCR做的细胞的，在提取完RNA后我做了电泳和浓度测定，结果都还不错。也顺利的反转录成了CDNA，在做β-actin的PCR时，结果很好，条带也比较清楚。我还做了两遍，先是做了正常对照组的，接着跑了所有样本的β-actin，所有样都出来了，但我现在已经重复不出来了，条件设置的都一样！我也思考了下原因，可能是CDNA降解了？或者是引物污染了？我只能想到这么多啊？请各位高手帮帮我啊，我的实验该怎样改进？谢谢了？现在的PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有。愁死我了啊！ 我的PCR体系是 PCR步骤: 20ul体系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 补足20ul 加样的顺序也是这样的，不知道合适不？ PCR上机设置温度: 处理 温度 时间 预变性 94℃ 5min 变性 94℃ 30s 退火 根据说明上下浮动2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循环 35 从第2个开始 45s/个 延伸 72 7min 4℃ Forever [ Last edited by 1949stone on 2011-5-20 at 17:59 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
留学--博士招生
已经有16人回复
-
化学工程，本211，求调剂，ab区不限
已经有4人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有270人回复
-
湖北师范大学招调剂啦
已经有7人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
317分 一志愿江南大学 化学工程学硕 求调剂
已经有6人回复
-
化工申博
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- PCR电泳，加样孔很亮，但目的条带却很淡，不知道怎么回事？
已经有24人回复
- 3‘RACE inner PCR 电泳结果总是有弥散现象回收条带不成带状什么原因啊？
已经有17人回复
- PCR 扩全长
已经有20人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 求助，PCR的电泳结果出了未知问题
已经有11人回复
- PCR后电泳条带异常
已经有10人回复
- 【求助/交流】PCR产物电泳条带弥散？？？
已经有30人回复
- 【求助/交流】做培养细胞的RT-PCR，β-actin内参出现两个条带，求原因。
已经有10人回复
- 【其他】大家做实验时，有没有活见鬼的事？
已经有53人回复
- 【求助/交流】pcr结果电泳条带很淡
已经有14人回复
- 【求助/交流】目的基因PCR后电泳出现多条带
已经有7人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【求助/交流】（5.20更新）PCR产物电泳没有条带，why?
已经有20人回复
swallow52u
银虫 (正式写手)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 415.5
- 散金: 42
- 红花: 5
- 帖子: 355
- 在线: 138.4小时
- 虫号: 477054
- 注册: 2007-12-13
- 性别: MM
- 专业: 临床药理
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暂时撤回。确实有用在补加 2011-05-20 11:03:08
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暂时撤回。确实有用在补加 2011-05-20 11:03:08
|
我的PCR体系是 PCR步骤: 20ul体系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 补足20ul 加样的顺序也是这样的，不知道合适不？ PCR上机设置温度: 处理 温度 时间 预变性 94℃ 5min 变性 94℃ 30s 退火 根据说明上下浮动2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循环 35 从第2个开始 45s/个 延伸 72 7min 4℃ Forever |
2楼2011-05-20 01:55:39
路人甲007
木虫 (正式写手)
小七
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3797.9
- 红花: 2
- 帖子: 597
- 在线: 206.8小时
- 虫号: 840731
- 注册: 2009-09-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
3楼2011-05-20 10:04:07
zhaohq1209
铁杆木虫 (著名写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 41 (小学生)
- 贵宾: 0.034
- 金币: 10666.7
- 散金: 587
- 红花: 12
- 帖子: 2113
- 在线: 333.7小时
- 虫号: 243823
- 注册: 2006-04-15
- 专业: 病原细菌、细菌感染与宿主
4楼2011-05-20 10:08:54
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
5楼2011-05-20 10:52:45
路人甲007
木虫 (正式写手)
小七
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3797.9
- 红花: 2
- 帖子: 597
- 在线: 206.8小时
- 虫号: 840731
- 注册: 2009-09-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
6楼2011-05-20 15:42:54
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
7楼2011-05-20 15:51:40
路人甲007
木虫 (正式写手)
小七
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 3797.9
- 红花: 2
- 帖子: 597
- 在线: 206.8小时
- 虫号: 840731
- 注册: 2009-09-04
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
8楼2011-05-20 16:07:53
天使托
专家顾问 (职业作家)
T.Shen
-
专家经验: +57 - MolEPI: 106
- 应助: 95 (初中生)
- 贵宾: 0.263
- 金币: 16348.8
- 散金: 593
- 红花: 74
- 沙发: 9
- 帖子: 3652
- 在线: 289小时
- 虫号: 441757
- 注册: 2007-10-27
- 专业: 微生物生理与生物化学
- 管辖: 微生物
9楼2011-05-20 16:22:21
10楼2011-05-20 18:03:34
