应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有
101/1返回列表
查看: 2904  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

swallow52u

银虫 (正式写手)

[求助] PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有

我是做的RT-PCR做的细胞的，在提取完RNA后我做了电泳和浓度测定，结果都还不错。也顺利的反转录成了CDNA，在做β-actin的PCR时，结果很好，条带也比较清楚。我还做了两遍，先是做了正常对照组的，接着跑了所有样本的β-actin，所有样都出来了，但我现在已经重复不出来了，条件设置的都一样！我也思考了下原因，可能是CDNA降解了？或者是引物污染了？我只能想到这么多啊？请各位高手帮帮我啊，我的实验该怎样改进？谢谢了？现在的PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有。愁死我了啊！
我的PCR体系是
PCR步骤: 20ul体系
MIX        10uL
cDNA        1 uL        
引物上游        1 uL，        
引物下游        1 uL
DEPC H2O        补足20ul        
加样的顺序也是这样的，不知道合适不？
PCR上机设置温度:
处理        温度        时间
预变性        94℃        5min
变性        94℃        30s
退火        根据说明上下浮动2℃        45s
延伸        72℃        30s
循环        35 从第2个开始        45s/个
延伸        72        7min
        4℃        Forever

[ Last edited by 1949stone on 2011-5-20 at 17:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我要我的幸福,谁也夺不走!
1楼 2011-05-20 01:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

swallow52u

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暂时撤回。确实有用在补加 2011-05-20 11:03:08
我的PCR体系是
PCR步骤: 20ul体系
MIX        10uL
cDNA        1 uL        
引物上游        1 uL，        
引物下游        1 uL
DEPC H2O        补足20ul        
加样的顺序也是这样的，不知道合适不？
PCR上机设置温度:
处理        温度        时间
预变性        94℃        5min
变性        94℃        30s
退火        根据说明上下浮动2℃        45s
延伸        72℃        30s
循环        35 从第2个开始        45s/个
延伸        72        7min
        4℃        Forever
赞一下(2人) 回复此楼
我要我的幸福,谁也夺不走!
2楼2011-05-20 01:55:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
★ ★
dhd997(金币+2): 可能是我粗心，您是否有更好的见解？ 2011-05-20 11:03:43
这个加分和EPI给的很莫名其妙啊  不知道版主怎么给的
赞一下(1人) 回复此楼
与人玫瑰手有余香
3楼2011-05-20 10:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
dhd997: 可能是我粗心，您是否有更好的见解？ 2011-05-20 11:03:53
引用回帖:
Originally posted by swallow52u at 2011-05-20 01:55:39:
我的PCR体系是
PCR步骤: 20ul体系
MIX        10uL
cDNA        1 uL        
引物上游        1 uL，        
引物下游        1 uL
DEPC H2O        补足20ul        
加样的顺序也是这样的，不知道合适 ...

这样也给金币和EPI，版版粗心了吧？
赞一下(1人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
4楼2011-05-20 10:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
1949stone: 也不要伤害大家的积极性啊 2011-05-20 17:58:28
不知道2楼给出的程度和体系是否能够帮助楼主解决问题呢？如果能，那么理应给EPI；可是楼主还没有尝试，所以。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
5楼2011-05-20 10:52:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
★
1949stone(金币+1): 刚刚发现啊 2011-05-20 17:59:37
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-20 10:52:45:
不知道2楼给出的程度和体系是否能够帮助楼主解决问题呢？如果能，那么理应给EPI；可是楼主还没有尝试，所以。。。

你不觉得二楼就是楼主吗
赞一下(1人) 回复此楼
与人玫瑰手有余香
6楼2011-05-20 15:42:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
引用回帖:
Originally posted by 路人甲007 at 2011-05-20 15:42:54:
你不觉得二楼就是楼主吗

额。。。我刚反应过来，关键是被版主的EPI给误导了，我还以为2楼的童鞋只是给出他的反应程序呢。。。

ps:做实验太累了，都有点晕了。
赞一下 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
7楼2011-05-20 15:51:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
引用回帖:
Originally posted by 天使托 at 2011-05-20 15:51:40:
额。。。我刚反应过来，关键是被版主的EPI给误导了，我还以为2楼的童鞋只是给出他的反应程序呢。。。

ps:做实验太累了，都有点晕了。

貌似版主现在也还没有反应过来呢
赞一下 回复此楼
与人玫瑰手有余香
8楼2011-05-20 16:07:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天使托

专家顾问 (职业作家)

T.Shen
1949stone: 原来如此 哈哈 2011-05-20 17:59:19
引用回帖:
Originally posted by 路人甲007 at 2011-05-20 16:07:53:
貌似版主现在也还没有反应过来呢

版主做实验也比较累，还要管理板块，很不容易滴。。。体谅体谅撒。。。
赞一下(1人) 回复此楼
Whenever,Wherever,Anyway!MustRemember:Fight!KeepFighting!NeverGiveUp!
9楼2011-05-20 16:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

swallow52u(金币+1): 2011-05-21 00:38:35
swallow52u(金币+1): 2011-05-22 10:42:11
swallow52u(金币+1): 2011-05-24 15:32:05
MIX每次用的时候要混匀；加样后也要混匀；模版降解是个问题，每次吸取模板时稍微吹打下；引物方面降解可能性稍小点；每次加样可以放冰上，尝试下！反应体系只要你以前出来过，应该问题不大，模版可以考虑重做，引物若有降解，在电泳时能看出来的啊！
赞一下 回复此楼
自己的路，自己快乐的走
10楼2011-05-20 18:03:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 swallow52u 的主题更新
101/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +8 wangze12014 2026-08-14 10/500 2026-08-17 17:05 by xter9665
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 5/250 2026-08-17 16:38 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +34 医学老男孩 2026-08-13 81/4050 2026-08-17 16:20 by yudaoqian88
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 6GojgJvkDudM 2026-08-16 7/350 2026-08-17 16:14 by CBFiACZS7HAK
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +12 Ldrop2023 2026-08-13 15/750 2026-08-17 15:02 by 小豌豆_发芽
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 EWi2p09MOOv8 2026-08-16 6/300 2026-08-17 14:02 by EYK67XJMj64E
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 i7NFEVbjQMM5 2026-08-16 4/200 2026-08-17 12:10 by 4GBAYCdVQoK3
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6GojgJvkDudM 2026-08-16 3/150 2026-08-17 09:49 by xLVPIRuSvCUe
[论文投稿] 岩土工程学报什么时候才能终审完呐 25+3 yeager111 2026-08-10 4/200 2026-08-16 20:42 by tfang
[基金申请] 时间戳又变了8-15 +13 archvillain 2026-08-15 25/1250 2026-08-16 20:13 by zhaosm1982
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +3 Tide man 2026-08-14 3/150 2026-08-16 17:47 by jurkat.1640
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 26/1300 2026-08-16 12:35 by 启萌科技
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +4 yuleib84 2026-08-11 4/200 2026-08-14 23:05 by lfy8008
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭