应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有
51/1返回列表
查看: 2325  |  回复: 9
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

swallow52u

银虫 (正式写手)

[求助] PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有

我是做的RT-PCR做的细胞的，在提取完RNA后我做了电泳和浓度测定，结果都还不错。也顺利的反转录成了CDNA，在做β-actin的PCR时，结果很好，条带也比较清楚。我还做了两遍，先是做了正常对照组的，接着跑了所有样本的β-actin，所有样都出来了，但我现在已经重复不出来了，条件设置的都一样！我也思考了下原因，可能是CDNA降解了？或者是引物污染了？我只能想到这么多啊？请各位高手帮帮我啊，我的实验该怎样改进？谢谢了？现在的PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有。愁死我了啊！
我的PCR体系是
PCR步骤: 20ul体系
MIX        10uL
cDNA        1 uL        
引物上游        1 uL，        
引物下游        1 uL
DEPC H2O        补足20ul        
加样的顺序也是这样的，不知道合适不？
PCR上机设置温度:
处理        温度        时间
预变性        94℃        5min
变性        94℃        30s
退火        根据说明上下浮动2℃        45s
延伸        72℃        30s
循环        35 从第2个开始        45s/个
延伸        72        7min
        4℃        Forever

[ Last edited by 1949stone on 2011-5-20 at 17:59 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
我要我的幸福,谁也夺不走!
1楼 2011-05-20 01:36:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tongyanna

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

swallow52u(金币+1): 2011-05-21 00:38:35
swallow52u(金币+1): 2011-05-22 10:42:11
swallow52u(金币+1): 2011-05-24 15:32:05
MIX每次用的时候要混匀；加样后也要混匀；模版降解是个问题，每次吸取模板时稍微吹打下；引物方面降解可能性稍小点；每次加样可以放冰上，尝试下！反应体系只要你以前出来过，应该问题不大，模版可以考虑重做，引物若有降解，在电泳时能看出来的啊！
赞一下 回复此楼
自己的路，自己快乐的走
10楼2011-05-20 18:03:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

swallow52u

银虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暂时撤回。确实有用在补加 2011-05-20 11:03:08
我的PCR体系是
PCR步骤: 20ul体系
MIX        10uL
cDNA        1 uL        
引物上游        1 uL，        
引物下游        1 uL
DEPC H2O        补足20ul        
加样的顺序也是这样的，不知道合适不？
PCR上机设置温度:
处理        温度        时间
预变性        94℃        5min
变性        94℃        30s
退火        根据说明上下浮动2℃        45s
延伸        72℃        30s
循环        35 从第2个开始        45s/个
延伸        72        7min
        4℃        Forever
赞一下(2人) 回复此楼
我要我的幸福,谁也夺不走!
2楼2011-05-20 01:55:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

路人甲007

木虫 (正式写手)

小七
★ ★
dhd997(金币+2): 可能是我粗心，您是否有更好的见解？ 2011-05-20 11:03:43
这个加分和EPI给的很莫名其妙啊  不知道版主怎么给的
赞一下(1人) 回复此楼
与人玫瑰手有余香
3楼2011-05-20 10:04:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaohq1209

铁杆木虫 (著名写手)
dhd997: 可能是我粗心，您是否有更好的见解？ 2011-05-20 11:03:53
引用回帖:
Originally posted by swallow52u at 2011-05-20 01:55:39:
我的PCR体系是
PCR步骤: 20ul体系
MIX        10uL
cDNA        1 uL        
引物上游        1 uL，        
引物下游        1 uL
DEPC H2O        补足20ul        
加样的顺序也是这样的，不知道合适 ...

这样也给金币和EPI，版版粗心了吧？
赞一下(1人) 回复此楼
我有一个梦想，我梦想有一天，我们的人民可以根据自己的意愿与消费能力，居住在自己愿意居住的地方。
4楼2011-05-20 10:08:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 341求调剂 +5 捣蛋猪猪 2026-03-11 7/350 2026-03-17 19:09 by 捣蛋猪猪
[考研] 312求调剂 +4 陌宸希 2026-03-16 5/250 2026-03-17 17:09 by ruiyingmiao
[考研] 311求调剂 +8 冬十三 2026-03-15 8/400 2026-03-17 16:59 by ruiyingmiao
[考研] 材料与化工求调剂 +5 为学666 2026-03-16 5/250 2026-03-17 16:40 by 无际的草原
[考研] 290求调剂 +3 p asserby. 2026-03-15 4/200 2026-03-17 16:35 by wangkm
[考研] 268求调剂 +6 好运连绵不绝 2026-03-12 7/350 2026-03-17 14:56 by 呦呦忧郁
[考研] 211本，11408一志愿中科院277分，曾在中科院自动化所实习 +6 Losir 2026-03-12 7/350 2026-03-17 12:09 by danranxie
[考研] 275求调剂 +4 太阳花天天开心 2026-03-16 4/200 2026-03-17 10:53 by 功夫疯狂
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-13 5/250 2026-03-17 10:15 by Sammy2
[考研] 278求调剂 +3 Yy7400 2026-03-13 3/150 2026-03-17 08:24 by laoshidan
[考研] 326求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-15 3/150 2026-03-16 07:33 by Iveryant
[考研] 0856专硕279求调剂 +5 加油加油！? 2026-03-15 5/250 2026-03-15 11:58 by 2020015
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工085600调剂求老师收留 +9 jiaanl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 20:22 by JourneyLucky
[考研] 【考研调剂求收留】 +3 Ceciilia 2026-03-11 3/150 2026-03-13 20:18 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 0817化学工程与技术考研312分调剂 +3 T123 tt 2026-03-12 3/150 2026-03-13 10:49 by houyaoxu
[考研] 283求调剂，材料、化工皆可 +8 苏打水7777 2026-03-11 10/500 2026-03-13 09:06 by Linda Hu
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭