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swallow52u银虫 (正式写手)
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[求助]
PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有
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我是做的RT-PCR做的细胞的，在提取完RNA后我做了电泳和浓度测定，结果都还不错。也顺利的反转录成了CDNA，在做β-actin的PCR时，结果很好，条带也比较清楚。我还做了两遍，先是做了正常对照组的，接着跑了所有样本的β-actin，所有样都出来了，但我现在已经重复不出来了，条件设置的都一样！我也思考了下原因，可能是CDNA降解了？或者是引物污染了？我只能想到这么多啊？请各位高手帮帮我啊，我的实验该怎样改进？谢谢了？现在的PCR的电泳结果是除了Marker能出来条带，其他都是什么都没有。愁死我了啊！ 我的PCR体系是 PCR步骤: 20ul体系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 补足20ul 加样的顺序也是这样的，不知道合适不？ PCR上机设置温度: 处理 温度 时间 预变性 94℃ 5min 变性 94℃ 30s 退火 根据说明上下浮动2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循环 35 从第2个开始 45s/个 延伸 72 7min 4℃ Forever [ Last edited by 1949stone on 2011-5-20 at 17:59 ] |
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5楼2011-05-20 10:52:45
swallow52u
银虫 (正式写手)
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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-20 08:29:27
dhd997(EPI-1): 暂时撤回。确实有用在补加 2011-05-20 11:03:08
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dhd997(EPI-1): 暂时撤回。确实有用在补加 2011-05-20 11:03:08
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我的PCR体系是 PCR步骤: 20ul体系 MIX 10uL cDNA 1 uL 引物上游 1 uL， 引物下游 1 uL DEPC H2O 补足20ul 加样的顺序也是这样的，不知道合适不？ PCR上机设置温度: 处理 温度 时间 预变性 94℃ 5min 变性 94℃ 30s 退火 根据说明上下浮动2℃ 45s 延伸 72℃ 30s 循环 35 从第2个开始 45s/个 延伸 72 7min 4℃ Forever |
2楼2011-05-20 01:55:39
路人甲007
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zhaohq1209
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4楼2011-05-20 10:08:54
