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韩元富豪

金虫 (小有名气)

[求助] PCR产物跑电泳,随着跑电泳时间的增加,,条带会下移,最后竟然消失了,怎么回事呀 已有15人参与

做了很久的PCR,一直是引物二聚体,昨天变化了PCR程序,没有引物二聚体了,出现了单一的目的条带,但发现,随着跑电泳时间的增加,,条带会下移,刚开始很亮,然后于是直接纯化,跑电泳, 竟然什么也没有,今天又做了一次,重新配了胶,又做了一次PCR,还是出现了单一条带,特地每隔10分钟用成像仪看一下,结果还是做天那样,随着时间的增加,条带会下移,最后都消失了,把PCR产物也纯化了,跑电泳还是什么都没有,怎么回事啊,该怎么办(模板DNA又跑了一遍,没有降解)
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:44:45
染料跑出去了当然看不到啦

[ 发自小木虫客户端 ]
4楼2014-05-11 23:00:07
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普通回帖

zuolihui001

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:44:55
条带跑得时间太长,跑到胶外面去了吧!

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-05-11 21:17:56
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Davidzjy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:45:03
不知道LZ是怎么定义胶中"上下左右"的
如果你说的"下移"是沿电流方向的移动 那么这是完全正常的现象
时间越长条带跑得越远嘛
3楼2014-05-11 22:50:35
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daxulalala

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
韩元富豪(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2014-05-12 10:45:11
你用的什么染料啊,是EB吗?加到胶里的还是跑完染色啊?
5楼2014-05-12 00:09:22
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by zuolihui001 at 2014-05-11 21:17:56
条带跑得时间太长,跑到胶外面去了吧!

那这单一的条带是不是我的目的条带呢?一般PCR产物跑电泳,电压,时间大概怎么确定,我的l两个PCR产物是281bp和350bp
6楼2014-05-12 08:49:08
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-05-11 23:00:07
染料跑出去了当然看不到啦

那这单一的条带是不是我的目的条带呢?一般PCR产物跑电泳,电压,时间大概怎么确定,我的l两个PCR产物是281bp和350bp
7楼2014-05-12 08:50:38
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by daxulalala at 2014-05-12 00:09:22
你用的什么染料啊,是EB吗?加到胶里的还是跑完染色啊?

不是EB,是glostine,是胶溶化后加到胶了的,我都不知道现在的条带是不是我想要的了,位置一直在变,纯化后,跑电泳什么也没有
8楼2014-05-12 08:52:58
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shucanwei

木虫 (正式写手)

有图吗?
唯以一人治天下,不以天下奉一人。
9楼2014-05-12 09:07:43
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韩元富豪

金虫 (小有名气)

引用回帖:
9楼: Originally posted by shucanwei at 2014-05-12 09:07:43
有图吗?

没有,那个成像仪不带照相功能,就是PCR条件优化的时候,一直是只有引物二聚体,而且都很亮,前天条件优化了,终于没有了,只有单一的条带,应该不是引物二聚体,跑20分钟,就在我的应该出现目的条带的位置,和marker对比的,在跑10分钟,在看,条带就下移了,再跑10 分钟,条带就没有了,因为只有单一条带,就直接纯化了,没有切胶回收,跑电泳后,什么也没有
10楼2014-05-12 09:25:22
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