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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » ＰＣＲ产物跑电泳，随着跑电泳时间的增加，，条带会下移，最后竟然消失了，怎么回事呀
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shucanwei

木虫 (正式写手)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 韩元富豪 at 2014-05-12 09:25:22
没有，那个成像仪不带照相功能，就是ＰＣＲ条件优化的时候，一直是只有引物二聚体，而且都很亮，前天条件优化了，终于没有了，只有单一的条带，应该不是引物二聚体，跑２０分钟，就在我的应该出现目的条带的位置， ...

在跑１０分钟，在看，条带就下移了，再跑１０　分钟，条带就没有了（此时marker在吗？）
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唯以一人治天下，不以天下奉一人。
11楼2014-05-12 09:53:58
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yinlizhangli

金虫 (初入文坛)

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★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-05-12 15:19:38
目的条带比较小，电压不需要太高，时间也不需要太长、、、电压高了或时间长了 自然会跑出去看不到了、、、
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12楼2014-05-12 11:15:07
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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gyesang: 金币+3, 鼓励回帖交流！ 2014-05-12 15:19:44
1.你既然你的PCR已经得到单一条带根本不用每隔几分钟看一次条带，条带肯定越跑越下。一般你点样的时候需要和loading buffer混合吧，跑的时候你看你胶上的那条蓝带，跑到离胶边缘1cm就可以了，跑胶时间还和你胶浓度和基因大小有关。
2.纯化的亲和柱都是有一个回收量程的，比如只能亲和200bp——10KB的基因，你的基因也就200——300bp，你好好看看说明书上标注的回收量程，是不是你的基因就不在量程里。就算是在量程里，很多公司的纯化试剂盒对过小的DNA回收效果都很差。你多P管，把这几管同时过一个柱子纯化看看能出来东西不，不行的话就换其他公司的试剂盒纯化或者割胶回收试剂盒。
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大家相互帮助哈
13楼2014-05-12 15:02:40
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906394648

新虫 (初入文坛)

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-01 17:05:47
跑的时间太长了，一般琼脂糖电泳最好的情况15-20min就能跑完，你应该看看MAKER跑的怎么样
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14楼2014-05-13 19:19:56
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ws110422

新虫 (小有名气)

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★ ★
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韩元富豪(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-06-01 17:05:56
你的意思是，比如原本条带出现在300bp的位置，再跑10分钟，跑到200bp的位置了么？会不会是染料的问题，我们实验室前阵子换了个染料，跑胶的时候会在目的条带附近也有一条挺亮的带，但不是目的条带，跑的时间长了就能跟目的条带分开了，目的条带和那条染料带亮的不一样
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15楼2014-05-13 19:48:34
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weiminlee

木虫 (小有名气)

Capital

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方向放反了吧。应放在阴极。核酸带负电的。

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不想当将军的士兵不是一个好船长
16楼2014-05-14 11:01:47
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weiminlee

木虫 (小有名气)

Capital

【答案】应助回帖

还有就是离孑强度和pH值有无问题

[ 发自小木虫客户端 ]
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不想当将军的士兵不是一个好船长
17楼2014-05-14 11:05:09
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冉兆星

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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引用回帖:
7楼: Originally posted by 韩元富豪 at 2014-05-12 08:50:38
那这单一的条带是不是我的目的条带呢？一般ＰＣＲ产物跑电泳，电压，时间大概怎么确定，我的l两个PCR产物是281bp和350bp...

你怎么不点Marker？
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18楼2014-05-14 11:20:38
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咸鱼~翻身

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 韩元富豪 at 2014-05-12 09:25:22
没有，那个成像仪不带照相功能，就是ＰＣＲ条件优化的时候，一直是只有引物二聚体，而且都很亮，前天条件优化了，终于没有了，只有单一的条带，应该不是引物二聚体，跑２０分钟，就在我的应该出现目的条带的位置， ...

向下扩散。
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19楼2014-07-31 09:44:07
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
韩元富豪(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-08-10 10:33:36
过柱回收的时候，有的是400bp以下的需要加异丙醇才能回收到的。或者你直接乙醇沉淀。
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20楼2014-07-31 17:15:08
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