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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物电泳，条带弥散的原因
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月

[求助] PCR产物电泳，条带弥散的原因

最近提的DNA，PCR后跑电泳，条带总是弥散，不知道什么原因，求高手指教。

Administrator 2012-10-09 2.jpg
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xyz_su

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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
1楼 2012-10-09 10:51:25
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by rong51 at 2012-10-09 11:18:05
一般需要稀释到多少合适呢？...

只要看你的浓度，如果你是用试剂盒提取的DNA，那就稀释20-50倍吧！
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持之以恒、永不放弃！
11楼2012-10-09 12:42:48
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乌和尚

木虫 (小有名气)
适当降低引物浓度
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14楼2014-01-29 22:24:49
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普通回帖

chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rong51: 金币+2, ★有帮助 2012-10-09 11:03:51
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:50:20
如下方法都可以提高特异性，
1, 降低模板量
2，提高退火温度
3，降低镁离子浓度，
4，加入适量二甲基亚砜
5，适当降低引物浓度
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2楼2012-10-09 11:01:57
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
rong51: 金币+2, ★有帮助 2012-10-09 11:11:21
个人觉得你的模板浓度可能偏高或者质量不高是主要原因
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3楼2012-10-09 11:02:35
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:01:57
如下方法都可以提高特异性，
1, 降低模板量
2，提高退火温度
3，降低镁离子浓度，
4，加入适量二甲基亚砜
5，适当降低引物浓度

同样的模板量，镁离子浓度，引物浓度，同样的PCR程序，以前做得挺好的。这两次提的DNA，不知道为什么带就是不清晰，DNA浓度检测很高，纯度也很好。
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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
4楼2012-10-09 11:08:39
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月
引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:02:35
个人觉得你的模板浓度可能偏高或者质量不高是主要原因

DNA提取后放4度过夜，第二天跑的PCR，不知是否有影响
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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
5楼2012-10-09 11:10:53
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gwd0312

木虫 (正式写手)

“无冕之王”

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rong51: 金币+2, ★有帮助 2012-10-09 11:16:43
一般提取的ＤＮＡ模版做ＰＣＲ需要稀释，可能是你的模版浓度过大了！
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持之以恒、永不放弃！
6楼2012-10-09 11:12:18
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-09 15:50:33
引用回帖:
5楼: Originally posted by rong51 at 2012-10-09 11:10:53
DNA提取后放4度过夜，第二天跑的PCR，不知是否有影响...

不影响。
楼主，DNA纯度高如果是用分光光度计上A260/A280比值来确定的，那不能说明纯度高，DNA有降解是无法确定的。如果是提了DNA后跑胶后无弥散而是只有1条很亮的带，那可以说明纯度高。
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7楼2012-10-09 11:16:16
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月
引用回帖:
6楼: Originally posted by gwd0312 at 2012-10-09 11:12:18
一般提取的ＤＮＡ模版做ＰＣＲ需要稀释，可能是你的模版浓度过大了！

一般需要稀释到多少合适呢？
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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
8楼2012-10-09 11:18:05
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月
引用回帖:
7楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:16:16
不影响。
楼主，DNA纯度高如果是用分光光度计上A260/A280比值来确定的，那不能说明纯度高，DNA有降解是无法确定的。如果是提了DNA后跑胶后无弥散而是只有1条很亮的带，那可以说明纯度高。...

确实是这样的。
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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
9楼2012-10-09 11:22:15
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hofo336699

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rong51: 金币+1 2012-10-09 11:42:13
可能模板质量不高是主要原因
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懒虫啊！
10楼2012-10-09 11:39:51
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