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huichong

铁虫 (初入文坛)

[求助] 我的pcr产物怎么跟瀑布一样,究竟是为什么

大家帮忙看看,我p的是老师原来pcr的产物,大概9kb,我拿这做模板,怎么p出来是这样子的啊,究竟什么原因啊,
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huichong

铁虫 (初入文坛)

西瓜: 回帖置顶 2011-12-28 13:12:32
诶。。。额明明传图了。怎没了?现穿上。。。

左右都是maker

5楼2011-12-28 01:25:48
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good! 2011-12-31 22:09:08
引用回帖:
18楼: Originally posted by huichong at 2011-12-31 02:02:14:
呵呵,我的模板测得浓度是49ng/ul,我稀释10倍还是这样的,要是稀释1000倍的话会不会太稀。要求的大概也得2-10ng/ul啊??谢谢

要求的没那么高浓度,你说的1-10ng/ul可能指的是基因组DNA的浓度,因为某些基因在基因组中拷贝数较低,所以基因组作模板PCR需较高的浓度。
但你的实验中用的别人的PCR产物,条带不会很大,所以可以使用很低的模板浓度。
PS:我做载体构建的时候使用不同质粒做模板(大约7K-10K),浓度一般在10-50pg/ul(pg是ng的1/1000),也就是将小提的质粒稀释1000倍。
一直向前!
22楼2011-12-31 11:31:37
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普通回帖

heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
没图片啊楼主!!
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
2楼2011-12-27 16:43:55
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

求图片!
只要路是对的,就不怕路远.
3楼2011-12-27 16:48:33
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amylose108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助哦 2012-01-04 08:48:30
我也做过很多这样的PCR,我分析多半是由于引物不好造成的,但如果你能把DNA摸板弄的够纯质量高的话,也可避免
4楼2011-12-27 21:36:52
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huichong

铁虫 (初入文坛)

我的模板今天测了260/280是1.85
6楼2011-12-28 01:28:39
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+2): good 2011-12-28 13:13:23
PCR产物用作模板再p的话很容易出现这样的弥散
是由于模板浓度太高引起的  稀释模板50倍,百倍甚至上千倍 基本上应该能解决
7楼2011-12-28 08:39:47
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huichong

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
: Originally posted by 老夏853 at 2011-12-28 08:39:47:
PCR产物用作模板再p的话很容易出现这样的弥散
是由于模板浓度太高引起的  稀释模板50倍,百倍甚至上千倍 基本上应该能解决

那会不会是我操作或是引物的问题啊,谢谢你
8楼2011-12-28 09:43:10
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖


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西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-28 13:13:43
你测定的模板260/280是1.85
,证明你的模板纯度高且浓度高(因为太低就测不出来了),所以稀释吧,1000倍
一直向前!
9楼2011-12-28 12:41:57
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
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西瓜(金币+2): 鼓励 2011-12-29 16:51:33
我做的时候也常出现这种情况,应该不是引物的问题.可能是电泳时候加样过多,或者PCR时候模板浓度过高造成的!建议楼主稀释下模板,另电泳时候加样可以少加点.
只要路是对的,就不怕路远.
10楼2011-12-28 20:04:33
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