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ccjjx

新虫 (初入文坛)

我震惊了!!!
41楼2012-02-29 21:12:33
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ccjjx

新虫 (初入文坛)

我真的震惊了!!为什么会有个人跟我一模一样的处境呢?!!我也是在做一个9KB的PCR,开始也用的老师的PCR产物(怕用完了,现在该用colony了),一样的P不出来。同样的实验,也是之前老师做成功过,同样的体系,同样的条件,到我这里就是做不出来!!跟楼主一样的退火温度,用的一样的酶,跑出来一样的瀑布状····我泪奔啊·····看到楼主的帖子,我还以为是我什么时候自己发的呢!
42楼2012-02-29 21:16:14
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steler_ly

铜虫 (正式写手)

有可能是浓度太高了  稀释下试试!
43楼2012-02-29 22:20:12
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jbbdpp

银虫 (小有名气)

换个更好的酶试一下,我也遇到过类似的问题,把模板的量减少,用的ex taq,结果马上就好了。
44楼2012-04-15 11:04:00
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ZMJ_jeremy

新虫 (小有名气)

模板260/280是1.85 只能说明纯度可以   那浓度是多少?浓度过高虽容易变脏 但不至于瀑布      瀑布原因可推测为: 1模板自身是否被污染 (微生物之类); 2 引物是否是自己设计的?设计是否符合标准?
45楼2012-04-15 12:05:51
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ZMJ_jeremy

新虫 (小有名气)

补充:还有产物的大小  如果太大或是CG浓度过高 还要考虑更换taq
46楼2012-04-15 12:07:55
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没有头的苍蝇

铁虫 (初入文坛)

我也遇到类似的情况,引物应该不会又什么问题,最有可能的就是你的模板要么是浓度太高,要么是是被污染的可能性很大,当然也有可能是降解了。希望楼主能够早日搞定!
47楼2014-04-07 01:05:02
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