应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的pcr产物怎么跟瀑布一样，究竟是为什么
473/5返回列表上一页12345下一页
查看: 3380  |  回复: 46
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by tengwan at 2011-12-31 02:57:30:
marker是多大？

好像胶不太好，没跑出点样孔呢，点样孔有东西要么就样品里有啥东西。

9kb的目标片段，marker应该也不小，但这marker的样子貌似比较小片段（？）

再制块胶，重新点样，这回样品点2个孔，有 ...

maker  是2000的，是小了。之前点样孔也没东西，后来就有了。好的我试试
赞一下 回复此楼
21楼2011-12-31 11:10:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-31 22:09:08
引用回帖:
18楼: Originally posted by huichong at 2011-12-31 02:02:14:
呵呵，我的模板测得浓度是49ng/ul，我稀释10倍还是这样的，要是稀释1000倍的话会不会太稀。要求的大概也得2-10ng/ul啊？？谢谢

要求的没那么高浓度，你说的1-10ng/ul可能指的是基因组DNA的浓度，因为某些基因在基因组中拷贝数较低，所以基因组作模板PCR需较高的浓度。
但你的实验中用的别人的PCR产物，条带不会很大，所以可以使用很低的模板浓度。
PS：我做载体构建的时候使用不同质粒做模板（大约7K-10K），浓度一般在10-50pg/ul（pg是ng的1/1000）,也就是将小提的质粒稀释1000倍。
赞一下(2人) 回复此楼
一直向前！
22楼2011-12-31 11:31:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
19楼: Originally posted by huichong at 2011-12-31 02:04:02:
我的模板很少也就几μ。所以每次加不敢多做。真是愁啊

体系按10个样配，但最后用只用1个
赞一下 回复此楼
真相是最大的奢侈品
23楼2011-12-31 12:44:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

瘟疫天使

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
做之前洗干净器材和材料，手机看不见图，但是之前我做的时候也遇到过类似的问题，希望对楼主有所帮助

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
赞一下 回复此楼
24楼2011-12-31 13:48:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zhangxn2010 at 2011-12-31 11:31:37:
要求的没那么高浓度，你说的1-10ng/ul可能指的是基因组DNA的浓度，因为某些基因在基因组中拷贝数较低，所以基因组作模板PCR需较高的浓度。
但你的实验中用的别人的PCR产物，条带不会很大，所以可以使用很低的模 ...

好的，太感谢了。我再做做试试
赞一下 回复此楼
25楼2011-12-31 22:54:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huichong

铁虫 (初入文坛)
★
小丹木木(金币+1): 不要灰心啊，继续努力 2012-01-04 08:53:52
我发现我太对不起各位的谆谆教导了。这是我把模板稀释了100倍跟1000倍的图片，发现跟以前是一样的。。。。。失败

最右边是maker，前四道是一种酶，后四道是另一种酶。都不行啊
赞一下(1人) 回复此楼
26楼2012-01-04 00:51:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lw19850128

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你这个应该是没有P出来
赞一下 回复此楼
27楼2012-01-04 14:26:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tengwan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
小丹木木(金币+1): 鼓励新虫积极应助哦 2012-01-11 13:37:28
目标片段要多长。

这个看着应该是引物不行。要么设计不行，要么合成质量不行。一般这种只有smear连个模糊条带样子都木有的，引物出问题可能性大。当然，要确保你的操作都没问题。

要不，找你们老师要他当年的引物，来做个对照p看看，还是你就是在用他当年的引物？
赞一下(1人) 回复此楼
28楼2012-01-06 23:42:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by tengwan at 2012-01-06 23:42:47:
目标片段要多长。

这个看着应该是引物不行。要么设计不行，要么合成质量不行。一般这种只有smear连个模糊条带样子都木有的，引物出问题可能性大。当然，要确保你的操作都没问题。

要不，找你们老师要他当年 ...

目的片段9kb，引物是老师用过的，拿序列让生工合成的。
赞一下 回复此楼
29楼2012-01-07 01:35:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fwks

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
PCR的延伸时间够吗？看上去没有任何条带，似乎是没有扩增成功啊。普通的taq酶大概是每分钟1KB，如果是高保真的pfu酶速度会更低，你列一下自己的程序让大家看看。
赞一下 回复此楼
30楼2012-01-07 10:58:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 huichong 的主题更新
473/5返回列表上一页12345下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程302分求调剂 +14 zyx上岸！ 2026-04-04 14/700 2026-04-09 23:21 by Ftglcn90
[考研] 本科西工大 0856 324求调剂 +9 wysyjs25 2026-04-09 9/450 2026-04-09 22:18 by bljnqdcc
[考研] 调剂 +8 卷卷卷心菜_ 2026-04-09 8/400 2026-04-09 22:16 by lbsjt
[考研] 293调剂 +22 yj1221 2026-04-08 23/1150 2026-04-09 21:15 by wutongshun
[考研] 一志愿211 0703化学 346分求调剂 +19 土豆er? 2026-04-09 20/1000 2026-04-09 20:33 by maddjdld
[考研] 085400 328分 求调剂 +8 喂你一个大橙子 2026-04-09 12/600 2026-04-09 19:20 by zl8213662
[考研] 299求调剂 +6 ZVVZ13 2026-04-08 6/300 2026-04-09 15:48 by wp06
[考研] 调剂 +3 青灯不负 2026-04-09 3/150 2026-04-09 15:28 by 释放天性
[考研] 288求调剂 +15 没有答案_ 2026-04-05 15/750 2026-04-09 10:22 by 5268321
[考研] 二次调剂求老师收留 +3 笑笑袁 2026-04-08 3/150 2026-04-08 23:50 by 醉在风里
[考研] 材料与化工专硕306分找合适调剂 +27 沧海轻舟e 2026-04-06 28/1400 2026-04-08 22:06 by wdyheheeh
[考研] 320分人工智能调剂 +9 振—TZ 2026-04-03 10/500 2026-04-08 19:56 by 振—TZ
[考研] 338求调剂 +5 小猪红色 678 2026-04-06 6/300 2026-04-07 21:18 by 乔哒哒哒
[考博] 博士申请 +3 IQwQl 2026-04-05 3/150 2026-04-07 20:31 by greychen00
[考研] 化学调剂 +18 艾志恒 2026-04-03 19/950 2026-04-07 16:00 by 起飞的比熊1
[考研] （调剂）一志愿报考哈尔滨工业大学0857资源与环境专业378分考生 +7 狠狠加油 2026-04-05 8/400 2026-04-06 16:52 by momo皓
[考研] 材料专硕283求调剂 +17 试试看呗 2026-04-04 18/900 2026-04-06 09:24 by 286640313
[考研] 材料化工306分找合适调剂 +14 沧海轻舟e 2026-04-04 14/700 2026-04-05 09:53 by 朱云虎202
[考研] 342求调剂 +3 Liang7111 2026-04-04 5/250 2026-04-04 19:47 by dongzh2009
[考研] 359求调剂 +7 hhhhaaaa$ 2026-04-04 7/350 2026-04-04 18:49 by imissbao
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭