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guojianping

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
（1）稀释模板浓度
（2）不行的话换引物
（3）退火温度做个梯度试试看
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11楼2011-12-28 20:43:12
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wanhscn

木虫 (职业作家)

哲学@草根
引用回帖:
5楼: Originally posted by huichong at 2011-12-28 01:25:48:
诶。。。额明明传图了。怎没了？现穿上。。。

左右都是maker

就一个样点两个marker以及用一整块胶？有点两费啊
配体系不要只配一pcr管的，不准
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真相是最大的奢侈品
12楼2011-12-29 09:14:22
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by huichong at 2011-12-28 09:43:10:
那会不会是我操作或是引物的问题啊，谢谢你

那这没法说啊 同样的条件换师兄师姐帮你试试
不过这种一般就是模板浓度过高引起的  稀释很多倍后试试就好
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13楼2011-12-29 10:26:59
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neon_alone

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得是模板降解了。。。
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14楼2011-12-29 14:13:46
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houhoujiayou

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2011-12-29 17:37:35
有时模板太高或是太低都不行，你可以先看看这弥散的带中你所要的目的条带有没有，如果是有，但是不是很清楚，那么就好办了，按理通过调整退火温度就行了，减少非特异性扩增。要是没有，那么还是多注意模板的质量吧，个人建议，呵呵
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15楼2011-12-29 15:44:07
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甘草桔梗

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引物不好吧。。。特异性不够
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16楼2011-12-29 17:09:59
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linatracy

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我觉得前面的说的挺对的，不过我觉的你的胶也有问题，因为你的Mark跑的也不是很清楚。
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17楼2011-12-29 17:36:57
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huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by zhangxn2010 at 2011-12-28 12:41:57:
你测定的模板260/280是1.85
，证明你的模板纯度高且浓度高（因为太低就测不出来了），所以稀释吧，1000倍

呵呵，我的模板测得浓度是49ng/ul，我稀释10倍还是这样的，要是稀释1000倍的话会不会太稀。要求的大概也得2-10ng/ul啊？？谢谢
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18楼2011-12-31 02:02:14
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huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by wanhscn at 2011-12-29 09:14:22:
就一个样点两个marker以及用一整块胶？有点两费啊
配体系不要只配一pcr管的，不准

我的模板很少也就几μ。所以每次加不敢多做。真是愁啊
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19楼2011-12-31 02:04:02
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tengwan

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励交流 2012-01-01 10:19:42
marker是多大？

好像胶不太好，没跑出点样孔呢，点样孔有东西要么就样品里有啥东西。

9kb的目标片段，marker应该也不小，但这marker的样子貌似比较小片段（？）

再制块胶，重新点样，这回样品点2个孔，有点梯度（比如一个5一个10微升），混合点loading buffre沉沉底再慢慢跑。
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20楼2011-12-31 02:57:30
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