楼: Originally posted by fwks at 2012-01-07 10:58:08:
PCR的延伸时间够吗？看上去没有任何条带，似乎是没有扩增成功啊。普通的taq酶大概是每分钟1KB，如果是高保真的pfu酶速度会更低，你列一下自己的程序让大家看看。

31楼: Originally posted by huichong at 2012-01-08 00:04:14:
程序是95度——3min
95度30s；56度30s；72度6min；——35cycles
72度10min
4度。。。

31楼: Originally posted by huichong at 2012-01-08 00:04:14:
程序是95度——3min
95度30s；56度30s；72度6min；——35cycles
72度10min
4度。。。

楼: Originally posted by fwks at 2012-01-08 10:02:35:
你要扩增的条带是9kb，延伸时间才6min，有点短啊。建议你把延伸时间改到10min以上试试。
而且扩增这么长的片段，要用到专门的扩增长片段的酶，你用的哪家公司的？有时候如果长片段中GC含量偏高，PCR体系中还需要 ...

楼: Originally posted by fwks at 2012-01-08 10:07:13:
另外不知道引物特异性高不高，如果延伸时间延长后出现多条带，建议使用降落PCR再试一下。你问问你老师以前他扩增时候的体系和程序是什么，还有引物的Tm值也搞清楚。