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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 我的pcr产物怎么跟瀑布一样，究竟是为什么
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huichong

铁虫 (初入文坛)

[求助] 我的pcr产物怎么跟瀑布一样，究竟是为什么

大家帮忙看看，我p的是老师原来pcr的产物，大概9kb，我拿这做模板，怎么p出来是这样子的啊，究竟什么原因啊，
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1楼 2011-12-27 00:50:03
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回帖置顶 ( 共有1个 )

huichong

铁虫 (初入文坛)
西瓜: 回帖置顶 2011-12-28 13:12:32
诶。。。额明明传图了。怎没了？现穿上。。。

左右都是maker
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5楼2011-12-28 01:25:48
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★ ★ ★
西瓜(金币+3): Good！ 2011-12-31 22:09:08
引用回帖:
18楼: Originally posted by huichong at 2011-12-31 02:02:14:
呵呵，我的模板测得浓度是49ng/ul，我稀释10倍还是这样的，要是稀释1000倍的话会不会太稀。要求的大概也得2-10ng/ul啊？？谢谢

要求的没那么高浓度，你说的1-10ng/ul可能指的是基因组DNA的浓度，因为某些基因在基因组中拷贝数较低，所以基因组作模板PCR需较高的浓度。
但你的实验中用的别人的PCR产物，条带不会很大，所以可以使用很低的模板浓度。
PS：我做载体构建的时候使用不同质粒做模板（大约7K-10K），浓度一般在10-50pg/ul（pg是ng的1/1000）,也就是将小提的质粒稀释1000倍。
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一直向前！
22楼2011-12-31 11:31:37
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普通回帖

heroyl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
没图片啊楼主！！
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
2楼2011-12-27 16:43:55
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wwb95599

铜虫 (小有名气)
求图片！
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只要路是对的，就不怕路远．
3楼2011-12-27 16:48:33
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amylose108

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助哦 2012-01-04 08:48:30
我也做过很多这样的PCR,我分析多半是由于引物不好造成的,但如果你能把DNA摸板弄的够纯质量高的话,也可避免
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4楼2011-12-27 21:36:52
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huichong

铁虫 (初入文坛)
我的模板今天测了260/280是1.85
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6楼2011-12-28 01:28:39
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老夏853

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): good 2011-12-28 13:13:23
PCR产物用作模板再p的话很容易出现这样的弥散
是由于模板浓度太高引起的  稀释模板50倍，百倍甚至上千倍 基本上应该能解决
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7楼2011-12-28 08:39:47
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huichong

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by 老夏853 at 2011-12-28 08:39:47:
PCR产物用作模板再p的话很容易出现这样的弥散
是由于模板浓度太高引起的  稀释模板50倍，百倍甚至上千倍 基本上应该能解决

那会不会是我操作或是引物的问题啊，谢谢你
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8楼2011-12-28 09:43:10
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zhangxn2010

木虫 (著名写手)

让一切随风飞翔

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+1): 鼓励交流 2011-12-28 13:13:43
你测定的模板260/280是1.85
，证明你的模板纯度高且浓度高（因为太低就测不出来了），所以稀释吧，1000倍
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一直向前！
9楼2011-12-28 12:41:57
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wwb95599

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+2): 鼓励 2011-12-29 16:51:33
我做的时候也常出现这种情况,应该不是引物的问题.可能是电泳时候加样过多,或者PCR时候模板浓度过高造成的!建议楼主稀释下模板,另电泳时候加样可以少加点.
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只要路是对的，就不怕路远．
10楼2011-12-28 20:04:33
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