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rong51

金虫 (小有名气)

半边月

[求助] PCR产物电泳,条带弥散的原因

最近提的DNA,PCR后跑电泳,条带总是弥散,不知道什么原因,求高手指教。

Administrator 2012-10-09 2.jpg
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身无彩凤双飞翼,心有灵犀一点通
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月

引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:01:57
如下方法都可以提高特异性,
1, 降低模板量
2,提高退火温度
3,降低镁离子浓度,
4,加入适量二甲基亚砜
5,适当降低引物浓度

同样的模板量,镁离子浓度,引物浓度,同样的PCR程序,以前做得挺好的。这两次提的DNA,不知道为什么带就是不清晰,DNA浓度检测很高,纯度也很好。
身无彩凤双飞翼,心有灵犀一点通
4楼2012-10-09 11:08:39
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
rong51: 金币+2, 有帮助 2012-10-09 11:03:51
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:50:20
如下方法都可以提高特异性,
1, 降低模板量
2,提高退火温度
3,降低镁离子浓度,
4,加入适量二甲基亚砜
5,适当降低引物浓度
2楼2012-10-09 11:01:57
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
rong51: 金币+2, 有帮助 2012-10-09 11:11:21
个人觉得你的模板浓度可能偏高或者质量不高是主要原因
3楼2012-10-09 11:02:35
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月

引用回帖:
3楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:02:35
个人觉得你的模板浓度可能偏高或者质量不高是主要原因

DNA提取后放4度过夜,第二天跑的PCR,不知是否有影响
身无彩凤双飞翼,心有灵犀一点通
5楼2012-10-09 11:10:53
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