应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » miRNA反转录后PCR产物跑电泳，有点拖尾，什么原因啊？真心求助！！
141/2返回列表12下一页
查看: 3200  |  回复: 13
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

没入尘埃5

金虫 (小有名气)

[求助] miRNA反转录后PCR产物跑电泳，有点拖尾，什么原因啊？真心求助！！

我反转录的时候用了250ng的miRNA，反转后PCR用了“模板0.4微升，引物各0.8微升，rTaq酶0.1微升，buffer 2微升，dNTP 1.6微升，水14.3微升”的20微升体系，PCR的时候用的实时定量PCR的程序，电泳检测用4%琼脂糖胶，Marker用20bp的。结果电泳条带拖尾，图中1、3、5、7是用看家基因验证的模板，2、4、6、8是我的目的条带，但是2、4、6拖尾，真的不知道什么原因了。真心求助啊！！求各位大仙帮忙啊！！！
回复此楼

» 本帖附件资源列表

  • 欢迎监督和反馈：小木虫仅提供交流平台，不对该内容负责。
    本内容由用户自主发布，如果其内容涉及到知识产权问题，其责任在于用户本人，如对版权有异议，请联系邮箱：xiaomuchong@tal.com
  • 附件 1 : 2012.09.02-3.bmp
    • 2012-09-02 20:36:32, 1.17 M

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
如果不努力，肯定没收获！
1楼 2012-09-02 20:43:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

lma223

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
没入尘埃5: 金币+2, ★有帮助 2012-09-04 13:32:08
小丹木木: 金币+3, 热心的新虫虫，谢谢对分子版的支持 2012-09-04 13:47:43
1）RNA是否有降解
2）引物是否有非特异性扩增 用Primer3或者Blast 检测
3）microRNA  gene是否有alternative splicing 或者alternative polyadenylation( heterogeneous) 存在
4）模版浓度过大，dNTP不足，导致PCR heteroduplex形成
赞一下(1人) 回复此楼
知行合一，致良知！
5楼2012-09-04 10:32:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看不到你的图，产物大小事多大啊？是不是你的胶浓度不对啊？
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
2楼2012-09-02 22:02:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-02 22:02:28
看不到你的图，产物大小事多大啊？是不是你的胶浓度不对啊？

我不知道怎么往上面贴图，就上传了，不知道怎么不能下载，唉，我的胶是4%琼脂糖胶，Marker用20bp的，我的产物是80bp左右的
赞一下 回复此楼
如果不努力，肯定没收获！
3楼2012-09-03 09:17:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
没入尘埃5: 金币+1 2012-09-04 13:31:02
引用回帖:
3楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-09-03 09:17:14
我不知道怎么往上面贴图，就上传了，不知道怎么不能下载，唉，我的胶是4%琼脂糖胶，Marker用20bp的，我的产物是80bp左右的...

产物这么小啊，胶浓度你可以试下2%、3%或者5%
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
4楼2012-09-04 07:52:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by lma223 at 2012-09-04 10:32:40
1）RNA是否有降解
2）引物是否有非特异性扩增 用Primer3或者Blast 检测
3）microRNA  gene是否有alternative splicing 或者alternative polyadenylation( heterogeneous) 存在
4）模版浓度过大，dNTP不足，导致P ...

RNA应该是没有降解，模板浓度也不大，这两种可能应该不是，但是引物确实是有非特异性扩增，之前预实验的时候验证着有的引物是没有非特异性扩增的，现在正式开始实验时本来没有非特异性扩增的引物的条带也不那么清楚了，有拖尾，miRNA的提取和反转录过程都是一样的，怎么回事呢？？急死了
赞一下 回复此楼
如果不努力，肯定没收获！
6楼2012-09-04 13:35:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaoyang1005

木虫 (初入文坛)
看看 谢谢谢想
回复此楼
7楼2012-09-04 13:36:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-04 07:52:54
产物这么小啊，胶浓度你可以试下2%、3%或者5%...

因为是小片段的产物，所以只能用大浓度的胶，看有的文献上说的是用4%的胶
赞一下 回复此楼
如果不努力，肯定没收获！
8楼2012-09-04 13:37:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zhaoyang1005 at 2012-09-04 13:36:49
看看 谢谢谢想

什么意思啊？？
回复此楼
如果不努力，肯定没收获！
9楼2012-09-04 13:53:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-09-04 13:37:36
因为是小片段的产物，所以只能用大浓度的胶，看有的文献上说的是用4%的胶...

恩，用百分之三试试，
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
10楼2012-09-04 16:06:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 没入尘埃5 的主题更新
141/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 系统今天又提示维护了，估计离放榜不远了 +12 winnerche 2026-07-29 16/800 2026-08-04 08:18 by Equinoxhua
[有机交流] 一个有机合成实验室都需要哪些设备？ 50+3 kf2781974 2026-07-31 10/500 2026-08-04 08:05 by 88817753
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:46 by k7OM8YghWbkC
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 07:37 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 13/650 2026-08-04 07:30 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 基础研究怎么拉横向，学校到款任务越来越多，难以完成 拉横向，都有哪些途径啊 +9 锦衣卫寒战 2026-07-28 13/650 2026-08-04 07:21 by Ermito
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 8/400 2026-08-04 06:15 by k7OM8YghWbkC
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 9/450 2026-08-04 06:07 by k7OM8YghWbkC
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 jRl3mE6ddZGq 2026-08-03 6/300 2026-08-04 04:47 by k7OM8YghWbkC
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 7/350 2026-08-04 04:46 by k7OM8YghWbkC
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 cu9Nq1xK233Z 2026-08-03 8/400 2026-08-04 03:21 by k7OM8YghWbkC
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
[高分子] UV压敏胶开发 +3 ichall 2026-07-30 5/250 2026-08-03 14:40 by Sunrisepay
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 16/800 2026-08-03 12:23 by fuweiguochen
[基金申请] 面上再次挂了，太难了，躺也躺不了，倦也卷不过，小学校之殇！ +19 低垂的野花 2026-07-31 25/1250 2026-08-03 09:25 by gy116024
[基金申请] 微信指数没变化，科研之友没阅读 +15 wangze12014 2026-07-28 19/950 2026-08-02 20:05 by 蔡棒棒菂
[考博] 2027年申博 50+3 射雕英雄胜 2026-07-30 3/150 2026-08-02 09:36 by lfy8008
[高分子] HXDI做水性聚氨酯乳液，是不是特别容易出渣 15+3 yuyusuv 2026-07-29 3/150 2026-07-31 09:21 by huizingga
[基金申请] 你们的时间戳变了吗 +3 archvillain 2026-07-30 4/200 2026-07-30 18:53 by levinzhwen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭