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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)

[求助] miRNA反转录后PCR产物跑电泳,有点拖尾,什么原因啊?真心求助!!

我反转录的时候用了250ng的miRNA,反转后PCR用了“模板0.4微升,引物各0.8微升,rTaq酶0.1微升,buffer 2微升,dNTP 1.6微升,水14.3微升”的20微升体系,PCR的时候用的实时定量PCR的程序,电泳检测用4%琼脂糖胶,Marker用20bp的。结果电泳条带拖尾,图中1、3、5、7是用看家基因验证的模板,2、4、6、8是我的目的条带,但是2、4、6拖尾,真的不知道什么原因了。真心求助啊!!求各位大仙帮忙啊!!!
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如果不努力,肯定没收获!
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-02 22:02:28
看不到你的图,产物大小事多大啊?是不是你的胶浓度不对啊?

我不知道怎么往上面贴图,就上传了,不知道怎么不能下载,唉,我的胶是4%琼脂糖胶,Marker用20bp的,我的产物是80bp左右的
如果不努力,肯定没收获!
3楼2012-09-03 09:17:14
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看不到你的图,产物大小事多大啊?是不是你的胶浓度不对啊?
生物化学与分子生物学
2楼2012-09-02 22:02:28
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


没入尘埃5: 金币+1 2012-09-04 13:31:02
引用回帖:
3楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-09-03 09:17:14
我不知道怎么往上面贴图,就上传了,不知道怎么不能下载,唉,我的胶是4%琼脂糖胶,Marker用20bp的,我的产物是80bp左右的...

产物这么小啊,胶浓度你可以试下2%、3%或者5%
生物化学与分子生物学
4楼2012-09-04 07:52:54
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lma223

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
没入尘埃5: 金币+2, 有帮助 2012-09-04 13:32:08
小丹木木: 金币+3, 热心的新虫虫,谢谢对分子版的支持 2012-09-04 13:47:43
1)RNA是否有降解
2)引物是否有非特异性扩增 用Primer3或者Blast 检测
3)microRNA  gene是否有alternative splicing 或者alternative polyadenylation( heterogeneous) 存在
4)模版浓度过大,dNTP不足,导致PCR heteroduplex形成
知行合一,致良知!
5楼2012-09-04 10:32:40
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