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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » miRNA反转录后PCR产物跑电泳，有点拖尾，什么原因啊？真心求助！！
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)

[求助] miRNA反转录后PCR产物跑电泳，有点拖尾，什么原因啊？真心求助！！

我反转录的时候用了250ng的miRNA，反转后PCR用了“模板0.4微升，引物各0.8微升，rTaq酶0.1微升，buffer 2微升，dNTP 1.6微升，水14.3微升”的20微升体系，PCR的时候用的实时定量PCR的程序，电泳检测用4%琼脂糖胶，Marker用20bp的。结果电泳条带拖尾，图中1、3、5、7是用看家基因验证的模板，2、4、6、8是我的目的条带，但是2、4、6拖尾，真的不知道什么原因了。真心求助啊！！求各位大仙帮忙啊！！！
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如果不努力，肯定没收获！
1楼 2012-09-02 20:43:22
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
没入尘埃5: 金币+1 2012-09-04 13:31:02
引用回帖:
3楼: Originally posted by 没入尘埃5 at 2012-09-03 09:17:14
我不知道怎么往上面贴图，就上传了，不知道怎么不能下载，唉，我的胶是4%琼脂糖胶，Marker用20bp的，我的产物是80bp左右的...

产物这么小啊，胶浓度你可以试下2%、3%或者5%
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
4楼2012-09-04 07:52:54
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lidonghong

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看不到你的图，产物大小事多大啊？是不是你的胶浓度不对啊？
赞一下 回复此楼
生物化学与分子生物学
2楼2012-09-02 22:02:28
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by lidonghong at 2012-09-02 22:02:28
看不到你的图，产物大小事多大啊？是不是你的胶浓度不对啊？

我不知道怎么往上面贴图，就上传了，不知道怎么不能下载，唉，我的胶是4%琼脂糖胶，Marker用20bp的，我的产物是80bp左右的
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如果不努力，肯定没收获！
3楼2012-09-03 09:17:14
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lma223

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
没入尘埃5: 金币+2, ★有帮助 2012-09-04 13:32:08
小丹木木: 金币+3, 热心的新虫虫，谢谢对分子版的支持 2012-09-04 13:47:43
1）RNA是否有降解
2）引物是否有非特异性扩增 用Primer3或者Blast 检测
3）microRNA  gene是否有alternative splicing 或者alternative polyadenylation( heterogeneous) 存在
4）模版浓度过大，dNTP不足，导致PCR heteroduplex形成
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知行合一，致良知！
5楼2012-09-04 10:32:40
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查看全部 14 个回答
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