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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物电泳，条带弥散的原因
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月

[求助] PCR产物电泳，条带弥散的原因

最近提的DNA，PCR后跑电泳，条带总是弥散，不知道什么原因，求高手指教。

Administrator 2012-10-09 2.jpg
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xyz_su

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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
1楼 2012-10-09 10:51:25
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
小丹木木: 金币+1, 鼓励交流 2012-10-09 15:50:33
引用回帖:
5楼: Originally posted by rong51 at 2012-10-09 11:10:53
DNA提取后放4度过夜，第二天跑的PCR，不知是否有影响...

不影响。
楼主，DNA纯度高如果是用分光光度计上A260/A280比值来确定的，那不能说明纯度高，DNA有降解是无法确定的。如果是提了DNA后跑胶后无弥散而是只有1条很亮的带，那可以说明纯度高。
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7楼2012-10-09 11:16:16
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
rong51: 金币+2, ★有帮助 2012-10-09 11:03:51
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-09 15:50:20
如下方法都可以提高特异性，
1, 降低模板量
2，提高退火温度
3，降低镁离子浓度，
4，加入适量二甲基亚砜
5，适当降低引物浓度
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2楼2012-10-09 11:01:57
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chenguestc

木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
rong51: 金币+2, ★有帮助 2012-10-09 11:11:21
个人觉得你的模板浓度可能偏高或者质量不高是主要原因
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3楼2012-10-09 11:02:35
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rong51

金虫 (小有名气)

半边月
引用回帖:
2楼: Originally posted by chenguestc at 2012-10-09 11:01:57
如下方法都可以提高特异性，
1, 降低模板量
2，提高退火温度
3，降低镁离子浓度，
4，加入适量二甲基亚砜
5，适当降低引物浓度

同样的模板量，镁离子浓度，引物浓度，同样的PCR程序，以前做得挺好的。这两次提的DNA，不知道为什么带就是不清晰，DNA浓度检测很高，纯度也很好。
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身无彩凤双飞翼，心有灵犀一点通
4楼2012-10-09 11:08:39
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