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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 同样的PCR产物，琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带，但marker每次都清晰
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ice清玉

新虫 (初入文坛)

[求助] 同样的PCR产物，琼脂糖凝胶电泳时而有带时而没带，但marker每次都清晰 已有10人参与

做3' 端race，PCR产物跑胶没有带，在冰箱4℃放了一天，第二天随手又跑了一次胶，竟然有带了，两次跑胶marker都很清晰。我以为这只是一个巧合，后来这种事情竟然发生了多次！头天做了PCR跑胶检测后有条带，放冰箱第二天再检测又没有带了！同样的，两次marker都清晰。还有一次，5' 端race，PCR之后检测没有条带，我死马当活马医依然跑胶准备回收，条带竟然又出来了，还很清晰....之前一直以为是PCR有问题，现在想想应该是胶有问题吧...可是问题在哪儿呢...TAT
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1楼 2014-02-20 13:37:55
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

jiaolong11a

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
难道你的EB分布不匀导致的，好可怕
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多情总被无情扰。。。愁
4楼2014-02-20 14:26:36
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ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 西门吹雪170 at 2014-02-20 19:21:29
你PCR结束之后点了多少跑电泳？你切胶回收一定是全点的，很有可能你检测点的量太小了，才看不到条带。另外，放冰箱之后会降解的

5ul 啊...降解也不可能全降解啊...有一次P完后接着跑电泳没有带，在冰箱放了两天后又跑了一次竟然出带了...
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10楼2014-02-20 19:30:06
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普通回帖

yyshpy007

禁虫 (正式写手)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2014-02-20 13:45:29
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ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-02-20 13:45:29
这么诡异，头回听说，肯定是你第一次跑胶时某些部分出问题了 ，比如配胶，染料等，你比对一下就知道了

我们实验室称量多少琼脂糖，加多少染料都写得清清楚楚贴在墙上的...TAT...一开始我也觉得是我配胶的问题，可是marker都很清晰啊...我也觉着诡异啊...难道就这样碰运气才能碰上哪次有条带我才能回收吗...太悲催了吧...
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3楼2014-02-20 13:52:36
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yyshpy007

禁虫 (正式写手)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-03-30 15:55:34
本帖内容被屏蔽
5楼2014-02-20 15:33:17
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ice清玉

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by yyshpy007 at 2014-02-20 15:33:17
如果不是你亲自配胶的话，还是确定一下是不是哪些材料有问题，或者EB最好在胶半冷却后加，沸腾时容易挥发...

染料没问题啊...配胶配了两三年了都没问题不可能突然就有问题了啊...TAT...我刚才又跑了一次，跑了一个别人的样，别人的样有带，我的没带...我几乎可以确定是我的PCR产物有问题了...可是我就是不明白为什么有时候有带，有时候没带呢...
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6楼2014-02-20 16:14:23
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西花厅

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
点样的时候是不是把胶给扎透了，或者没有点进去。
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7楼2014-02-20 16:19:05
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三蛰

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
很可能是点样问题。
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我不会！
8楼2014-02-20 16:43:54
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西门吹雪170

荣誉版主 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2014-02-23 23:53:30
你PCR结束之后点了多少跑电泳？你切胶回收一定是全点的，很有可能你检测点的量太小了，才看不到条带。另外，放冰箱之后会降解的
赞一下 回复此楼
植根于内心的修养；无需提醒的自觉；以约束为前提的自由；为别人着想的善良
9楼2014-02-20 19:21:29
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